核心问题：传统ABE发酵受限于低溶剂滴度和低生产率，需要开发高产菌株和高效发酵工艺。
关键发现：BKM19菌株在批式发酵中从85.2 g/L葡萄糖产生32.5 g/L ABE（丁醇17.6 g/L、乙醇10.5 g/L、丙酮4.4 g/L），ABE产量比亲本PJC4BK高30.5%（24.9 g/L），比野生型ATCC 824高90.5%（17.1 g/L） 等 3 条
核心问题：在酿酒酵母中构建高效合成丹参酮关键前体militradiene的代谢途径，解决天然提取产量低、化学合成困难的问题。
关键发现：初始整合菌株ZD-T-010在SD培养基中产生4.2 mg/L militradiene（含量4.4 mg/g细胞干重） 等 7 条
核心问题：酿酒酵母中已知组成型启动子数量有限，且缺乏在不同培养条件下并行表征的数据，限制了大型生化途径的构建与优化。
关键发现：14个启动子的GFP平均荧光强度差异不超过6倍，其中TEF1p最强，PGI1p最弱 等 4 条
核心问题：CYP153A6催化(S)-柠檬烯羟化制备(S)-紫苏醇过程中存在底物传质限制和副产物（紫苏醛、紫苏酸）形成问题，导致产率和选择性下降。
关键发现：P. putida KT2440（pGEc47ΔB）（pCom8-PFR1500）两相体系中副产物紫苏醛和紫苏酸占总氧化萜烯的26% 等 6 条
核心问题：Na+/Ca2+交换对细胞生理和代谢很重要，但其在真菌次级代谢生物合成中的作用尚不清楚。本研究旨在阐明Na+（而非K+）通过钙调磷酸酶信号转导调控灵芝酸生物合成的机制，并开发简单有效的诱导策略。
关键发现：添加100 mM Na+（培养初期）使总灵芝酸产量提高2.8倍 等 4 条
核心问题：改进混合培养发酵（MCF）代谢模型，解决Rodriguez模型预测与实验结果不一致的问题，尤其是NADH作为唯一产氢还原当量及有机酸转运能量处理不当导致预测失真。
关键发现：模型预测与文献实验数据更吻合：pH 5.5-6.0时氢产率约2.2 mol/mol_glucose，中性/碱性pH下降至0.7 mol/mol_glucose 等 4 条
核心问题：Mn2+在蘑菇次级代谢中的作用尚不清楚，通过添加Mn2+提高抗肿瘤灵芝酸（GAs）产量并阐明其调控机制。
关键发现：添加10 mM Mn2+使总灵芝酸产量提高2.2倍 等 6 条
核心问题：在工业酿酒酵母中实现高效纤维二糖利用，以解决纤维素生物燃料生产中的瓶颈问题，核心是平衡和增加异源途径的通量以达到高产量和高生产率。
关键发现：最终菌株#9-1-18与亲本相比，纤维二糖消耗率提高6.41倍（从0.388 g/L/h提高到2.50 g/L/h），乙醇生产率提高6.36倍（从0.137 g/L/h提高到0.89 g/L/h）。第一轮进化菌株#9的纤维二糖消耗率和乙醇生产率分别为2.24 g/L/h和0.77 g/L/h，... 等 3 条
核心问题：在温和、环境友好条件下对脂肪族化合物进行选择性氧官能化，利用低成本酶催化剂替代强氧化剂，解决传统有机合成中区域选择性差的问题。
关键发现：重组C. cinerea过氧合酶（44 kDa，Soret带418 nm，比活约100 U/mg）对多种脂肪族化合物具有区域选择性羟基化活性。饱和脂肪酸C12-C18均可被转化，其中肉豆蔻酸和棕榈酸30 min内几乎完全转化；月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸的ω-1/ω-2羟基化比例分别为57... 等 3 条
核心问题：缺乏在枯草芽孢杆菌中精细调控多基因表达的遗传工具，导致异源异戊二烯类化合物产量低，难以实现高水平生产。
关键发现：在摇瓶规模下实现约20 mg/L紫穗槐二烯产量，较枯草芽孢杆菌中最高报道异戊二烯产量（约0.5 mg/L）提高40倍 等 5 条
核心问题：3-羟基丙酸（3-HP）生物合成中，中间产物3-羟基丙醛（3-HPA）的毒性积累限制了产量和生产率，需要高效乙醛脱氢酶以平衡甘油脱水酶与脱氢酶的活性，减少3-HPA积累。
关键发现：GabD4在37°C、pH 8下对3-HPA的比活为55.5 U/mg，高于E. coli AldH的33.2 U/mg 等 6 条
核心问题：研究大肠杆菌及其pfkA缺失突变体在NADPH依赖性还原性全细胞生物转化中的全球基因表达变化，以及氧供对生物转化效率和代谢状态的影响。
关键发现：厌氧条件下，参考菌株和ΔpfkA突变体的MHB生产速率均为7.4 mmol h^-1 g_cdw^-1 等 3 条
核心问题：在酿酒酵母中优化甲羟戊酸途径代谢通量，以提高萜类化合物（特别是青蒿素前体amorpha-4,11-diene）的产量，并解决传统基因整合方法耗时费力的问题。
关键发现：['获得最佳突变株M3-2nd，其amorpha-4,11-diene产量超过亲本菌株13倍，约为64 mg/L石竹烯当量', '在所有测试的8个类胡萝卜素高产菌株中，amorpha-4,11-diene产量均高于亲本，最好的M7和M8在培养5天后产量为亲本的6倍', 'qPCR分析确认M3-...
核心问题：由于缺乏稳态动力学信息和萜类生物合成通路的深入理解，难以构建高效通用的微生物萜类生产系统。
关键发现：体外重构系统优化后法尼烯产量提高6倍，最大转换率约0.4 s⁻¹。工程菌F1生产130 mg/L法尼烯（比对照F0高400倍） 等 2 条
核心问题：在酿酒酵母中构建可控且遗传稳定的多基因异源生物合成途径，解决重复序列重组和途径开关难以调控的问题。
关键发现：构建了约16 kb的β-胡萝卜素合成途径，各轮整合效率为80%-100% 等 5 条
核心问题：异源甲羟戊酸途径在大肠杆菌中的产量、滴度和生产率受多因素影响，缺乏预测性模型来指导工程改造；传统通量模型不显式处理酶浓度，难以直接与实验衔接。
关键发现：体内ADS的kcat为0.022±0.008 s^-1，约为体外值(0.0068 s^-1)的3倍 等 5 条
核心问题：植物和微生物天然合成萜类产量低且为混合物，化学合成成本高、选择性差，需要构建高效、通用的微生物细胞工厂来生产单一萜类化合物。
关键发现：成功构建了萜类生产平台。突变株ZX178-08积累法尼醇(FOH)大于100 mg/L；表达HPS后prennaspirodiene产量达116±23.64 mg/L，亲本BY4741仅10.94±3.12 mg/L（约10倍差）；共表达截短型HMRG后prennaspirodiene进一步提... 等 3 条
核心问题：紫杉醇（Paclitaxel）作为一种重要抗癌药物，其天然来源产量极低、化学合成步骤多且成本高。关键前体taxadiene的合成由限速酶taxadiene synthase（TXS）催化，如何提高TXS活性并实现taxadiene在异源宿主中的高效生产是核心问题。
关键发现：['TXS的催化活性(kcat/KM = 3.5×10^3 s^-1 M^-1)比其他植物萜类环化酶低约两个数量级，kcat仅为0.0106 s^-1，表明其是紫杉醇生物合成的限速步骤', '在大肠杆菌中通过多元模块化方法，taxadiene产量最高可达1 g/L培养物', '在大肠杆菌K株中...
核心问题：大肠杆菌中紫穗槐二烯（青蒿素前体）的生产受限于产物胞内积累，需要找到并工程化内源转运蛋白促进产物外排以提高产量。
关键发现：敲除tolC导致胞内紫穗槐二烯特异性产量增加8.2倍，胞外产量降低90% 等 2 条
核心问题：探索在不依赖糖作为碳源的条件下，利用多种营养模式（异养、光异养、化能自养）生产高能三萜烃（botryococcene和squalene）的可行性，以Rhodobacter capsulatus为宿主。
关键发现：在小型培养中，好氧异养、厌氧光异养和好氧化能自养三种模式下，botryococcene或squalene产量均约为5 mg/gDW 等 4 条