核心问题：提高枯草杆菌蛋白酶E（Subtilisin E）对离液盐盐酸胍（GdmCl）和去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）的耐受性，以满足诊断试剂盒中细胞裂解和DNA提取的应用需求。
关键发现：获得最优变体SeSaM1-5（S62I/A153V/G166S/I205V），在1 M GdmCl中半衰期从<2 min提升至4.7 h（活性提高330%），在0.5% SDS中提升至2.7 h 等 5 条
核心问题：枯草芽孢杆菌3-异丙基苹果酸脱氢酶(IPMDH)热稳定性差，在高温下易失活，需要在不依赖三维结构信息的情况下提高其热稳定性。
关键发现：获得三个逐步氨基酸替换：T308I、I95L、M292I，使菌株在70°C下仍能亮氨酸自养生长 等 9 条
核心问题：阐明工程化CRABPII残基在视黄醛质子化席夫碱形成中的精确作用，特别是Lys132、Tyr134、Arg111和Glu121四个残基在亚胺形成和质子化中的角色。
关键发现：野生型CRABPII对全反式视黄酸的结合亲和力为2.0±1.2 nM 等 8 条
核心问题：阐明大肠杆菌L-苏氨酸脱氢酶（TDH）中His-90残基在催化中的作用及其对底物特异性的影响。
关键发现：野生型TDH的kcat为17.5 s^-1，Km(Thr)为3.03 mM；H90R、H90N、H90A突变体的kcat分别降至1.99、2.13、1.34 s^-1，Km(Thr)分别升至31.2、328、417 mM。突变体H90A的过渡态稳定化能降低6.6 kcal/mol。底物特异性方... 等 4 条
核心问题：如何在大肠杆菌中功能性表达未结合配体的血清视黄醇结合蛋白，并研究其配体结合与折叠稳定性
关键发现：重组RBP产量约0.15 mg/L培养物（A550=1.3） 等 5 条
核心问题：果蝇乙醇脱氢酶（ADH）天然偏好NAD+而非NADP+，如何通过蛋白质工程改变其辅因子特异性，使其对NADP+的亲和力与催化效率显著提高。
关键发现：A46R突变体对NADP+的Km降低2.5倍（0.23 mM vs 野生型3.09 mM），kcat提高约2.5倍（1.9 s-1 vs 等 5 条
核心问题：蝎毒中钙调素（calcins）来源有限，化学合成繁琐且需要正确折叠，重组表达常需手动氧化，难以高效获得有活性的重组钙调素。本论文旨在建立一种无需手动氧化即能获得有活性重组 Intreplicacin 的异源表达方法，并验证其对骨骼肌 ryanodine 受体（RyR1）的药理活性。
关键发现：重组 Intreplicacin 以剂量依赖方式激活骨骼肌 RyR1，表观 Kd = 等 13 条
核心问题：提高里氏木霉木聚糖酶Xyn2的热稳定性，使其适应高温工业条件。
关键发现：融合酶最适温度为65°C，比天然Xyn2高10°C 等 4 条
核心问题：人类β2-肾上腺素受体是一种高度疏水的G蛋白偶联受体，难以异源表达、纯化和结晶。需要设计一种蛋白水解稳定的融合蛋白，以便在细菌和昆虫细胞中高效生产并纯化该受体用于功能与结构研究。
关键发现：['E. coli中最高产量约3 pmol/mg粗膜蛋白，经蔗糖密度梯度离心后内膜炎性蛋白中达6 pmol/mg膜蛋白', 'E. coli中[3H]CGP-12177饱和结合KD=96±9 pM；竞争结合Ki：alprenolol 等 4 条
核心问题：探索决定无机焦磷酸酶热稳定性的关键因素，并通过随机嵌合酶法构建具有增强热稳定性的嵌合酶。
关键发现：Tth PPase在37°C的比活性为498 units/mg，E. coli PPase为1210 units/mg 等 3 条
核心问题：视紫红质中波长调节（opsin shift）的分子机制尚未阐明，且膜蛋白难以进行生物物理研究，缺乏彩色色素的3D结构，限制了对波长调节理论的验证。
关键发现：野生型CRABPII结合全反式视黄醛（RT）的Kd=6600 nM，λmax=377 nm；R132K:Y134F:R111L:T54V:L121E（KFLEV）突变体结合RT的Kd=2.7 nM，λmax=446 nm（pH 等 3 条
核心问题：重组金属酶磷酸甘露糖异构酶在大肠杆菌中异源表达时大量形成包涵体，可溶性活性蛋白得率低，需要提高可溶蛋白产量并理解体内外折叠机制。
关键发现：重组PMI在E.coli中最高表达量达总蛋白的30%，其中90%以包涵体形式存在 等 7 条
核心问题：确定大鼠附睾视黄酸结合蛋白(ERABP)配体特异性的结构决定因素，并尝试通过工程改造改变其配体结合特异性。
关键发现：野生型ERABP仅结合视黄酸，表观解离常数Kd为0.9±0.2×10^-6 M 等 2 条
核心问题：GGPS的C末端区域对其底物结合和催化活性稳定的作用机制尚不清楚
关键发现：野生型GGPS与Δ-4、Δ-8、Δ-12突变体的比活比值为1.0:0.84:0.26:0.0015 等 7 条
核心问题：非催化残基Val226通过与Trp125和Phe172的相互作用如何影响卤代烷脱卤酶催化速率，尤其是限速的卤离子释放步骤；能否通过改变Val226侧链大小而不直接突变催化残基来调节酶活性。
关键发现：Val226Ala和Val226Leu突变体对1,2-二溴乙烷的催化速率比野生型高2.5倍 等 3 条
核心问题：重组apo-RBP在大肠杆菌周质中折叠效率低，产生非天然二硫键异构体，产量低
关键发现：DsbC共表达使可溶性RBP产量增加约2倍（相对于不含dsbC的对照），并消除非天然二硫键异构体 等 2 条
核心问题：细胞色素P450cam通过分子间二硫键形成二聚体，导致酶在储存和操作中（尤其高浓度下）出现麻烦，影响实验解析。
关键发现：野生型P450cam二聚化速率常数k=1.09×10^-3 mM^-1 h^-1（4°C），1.1 mM样品8天内约20%转化为二聚体 等 3 条
核心问题：阐明嗜热脂肪芽孢杆菌乙醇脱氢酶热稳定性的分子基础，并探究单个氨基酸替换对其稳定性和底物特异性的影响
关键发现：野生型ADH-hT在75°C保温30min后仍保留75%活性，而Glu11Lys、Pro242Ala和双突变体在75°C下50%失活时间分别为30、26和18min 等 3 条
核心问题：大麦α-葡萄糖苷酶热稳定性不足，限制了其在工业乙醇生产中高温淀粉糖化（65-73°C）过程中的应用效率。
关键发现：大麦α-葡萄糖苷酶热稳定性最低，55°C处理10分钟后仅保留10%活性 等 4 条
核心问题：FPP作为混杂核受体配体，其激活不同核受体的结构基础不清楚，难以理性设计改变配体特异性的核受体突变体
关键发现：FPP激活核受体需满足：LBP体积在300-430 ų之间（激活组为300-400 ų，非激活组通常为400-850 ų） 等 3 条