核心问题：克隆并表征地衣芽孢杆菌的meso-2,3-丁二醇脱氢酶（B/BDH），解析其酶学性质，为定向改造地衣芽孢杆菌生产手性2,3-丁二醇提供理论依据。
关键发现：B/BDH在NADH存在下催化双乙酰还原为(3S)-乙偶姻（97.3% ee），进一步还原为(2S,3S)-2,3-丁二醇（97.3% ee, 96.5% de）。对双乙酰还原和2,3-丁二醇氧化的最适pH分别为5.0和10.0 等 3 条
核心问题：提高甘油脱水酶(GDHt)的活性和表达量，并探究其再激活因子(GDHtR)与配体的结合模式，以降低酶法生产1,3-丙二醇和3-羟基丙醛的成本。
关键发现：克隆的gldABC基因全长2735 bp，α/β/γ亚基分别编码1668/585/426 bp。胞外表达酶活为6.8 U/mg，胞内为3.2 U/mg，分别约为野生型的6倍和3倍。以甘油为底物时，1 min内G/P比值2.45，10 min后降至0.53，表明甘油导致酶快速失活。GDHt的Co... 等 2 条
核心问题：α-humulene合酶是zerumbone生物合成中的关键酶，但其关键酶学性质（温度、pH、动力学参数）此前未被表征，限制了其生物催化生产α-humulene的应用。
关键发现：重组α-humulene合酶以FDP为底物时产物为α-humulene（~94.5%）和β-caryophyllene（~5.5%） 等 8 条
核心问题：鉴定α-蒎烯氧化物裂解酶（Prα-POL）的编码基因，并在大肠杆菌中实现重组表达，以提高异诺瓦醛（isonovalal）的生物转化生产效率。
关键发现：Prα-POL基因长度为609 bp，编码202个氨基酸，预测蛋白分子量23.7 kDa，理论等电点5.23 等 6 条
核心问题：鉴定氧化葡萄糖杆菌中的两个旧黄酶同源物（GYE1和GYE2），并研究其对柠檬醛的加氢还原能力，特别是立体选择性还原柠檬醛顺式异构体（neral）为香茅醛。
关键发现：GYE1和GYE2与酵母OYE1的序列一致性分别为30%和31%，相似性分别为43.5%和44% 等 5 条
核心问题：已有的木糖还原酶（XR）催化效率普遍不高，且多数C. tropicalis来源的XR为NADPH依赖型，限制了以木糖为底物发酵生产木糖醇的效率；需要筛选并表征具有高催化效率和合适辅酶特异性的新型XR。
关键发现：自C. tropicalis SCTCC 300249克隆到975 bp的xyl1基因（GenBank登录号EU273285），在E. coli BL21(DE3)中可实现溶表达，约占细胞总蛋白的50% 等 4 条
核心问题：高效生物转化主要人参皂苷（Rb1、Rb2、Rc、Rd）为稀有人参皂苷F2，并表征相关β-葡萄糖苷酶。
关键发现：BglAch基因长1260bp，编码419个氨基酸，理论分子量45.8kDa，SDS-PAGE表观分子量43.7kDa 等 6 条
核心问题：解析奇楠种质（Aquilaria sinensis）中倍半萜合酶基因AsSS15的分子特征与创伤诱导表达特性，阐明其在沉香倍半萜生物合成中的作用。
关键发现：AsSS15基因全长1812 bp，编码603个氨基酸，蛋白分子量69.16 kDa，等电点5.92 等 8 条
核心问题：虎奶菇（Lignosus rhinocerus）作为传统药用真菌，其次生代谢产物研究不足，且野生资源稀缺。需要从基因组中挖掘未表征的倍半萜合酶基因，通过功能表征揭示其产物结构，以理解其生物活性的化学基础。
关键发现：虎奶菇TM02基因组大小为34.3 Mb，编码10,742个推定基因 等 3 条
核心问题：首次鉴定出一个以法尼基二磷酸为底物主要产生δ-cadinol的倍半萜合酶，该酶可能参与担子菌Boreostereum vibrans中boreovibrins的生物合成；此前尚无主要形成δ-cadinol的合酶报道。
关键发现：克隆的BvCS基因开放阅读框长1182 bp 等 3 条
核心问题：类胡萝卜素脱氢酶（特别是八氢番茄红素脱氢酶）是膜结合酶，难以在体外检测活性和纯化；同时不同来源的酶催化步数不同，需要有效的异源表达和功能表征体系。本文旨在建立通过光合细菌Rhodobacter capsulatus进行功能互补表达和从过表达菌株纯化CrtI蛋白的方法。
关键发现：R. capsulatus CrtI催化八氢番茄红素三步脱氢生成神经孢菌素 等 5 条
核心问题：在E. coli中直接表达具有催化活性的菠菜乙醇酸氧化酶（GAO），避免此前融合蛋白不溶或截短失活的问题，以获得足够量的活性酶用于结构与功能研究
关键发现：GAO在大肠杆菌中表达量约占可溶蛋白的1%，比酿酒酵母系统高约15倍 等 6 条
核心问题：在E. coli中利用T7 RNA聚合酶系统表达哺乳动物肝糖酵解/糖异生酶时，可溶活性酶回收率极低（通常小于1 mg/L培养物），大量蛋白以无活性或包涵体形式累积。
关键发现：在37°C诱导4h时，6PF-2-K/Fru-2,6-P2ase总蛋白积累达45 mg/L，但活性酶仅占总表达蛋白的0.6%-0.8%（约0.5 mg/L） 等 5 条
核心问题：解析多重产物倍半萜合酶δ-selinene synthase与γ-humulene synthase通过两个DDxxD基序等结构元件产生数十种倍半萜烯产物的分子基础，并通过定点突变和截短改变产物形成谱。
关键发现：γ-humulene synthase（γHS）和δ-selinene synthase（δSS）分别产生>50种和>30种倍半萜烯。γHS第一个DDxxD基序第一个天冬氨酸D343突变为丙氨酸（D343A）后，烯烃产物kcat降低>3000倍，无法获得可靠动力学数据 等 2 条
核心问题：鉴定和表征参与platensimycin（PTM）和platencin（PTN）生物合成的新型细菌二萜合酶（DTS），并建立系统的体内外研究方法。
关键发现：ΔptmT3突变完全消除PTM产生但不影响PTN产生 等 3 条
核心问题：MEP途径中间体在生物样品中含量低且缺乏合适的内标，难以准确测定其浓度，需要开发灵敏、准确的定量方法。
关键发现：在E. coli BL21(DE3)中，MEP代谢物在生长5-6小时、OD600 等 10 条
核心问题：如何生成并功能评价具有特定产物特异性的单萜合酶突变体，以满足合成生物学对高价值单萜的生产需求。
关键发现：野生型伪成熟酶R58催化产物中(-)-柠檬烯占96% 等 5 条
核心问题：现有萜烯合酶产物分析流程繁琐、耗时长、通量低，无法满足大规模突变体文库的高通量功能表征需求，且定量能力有限。
关键发现：开发了单管GC-MS分析萜烯合酶的方法 等 7 条
核心问题：难以直接测量细胞内异戊烯基二磷酸（IDP）及其异构体二甲基烯丙基二磷酸（DMADP）的浓度和比例，现有方法只能分别测定总量或单一物质，缺乏同时定量 IDP 和 DMADP 并计算比值的方法。
关键发现：体外平衡 DMADP/IDP 比为 等 9 条
核心问题：现有GC-MS等方法表征萜烯合酶活性存在耗时长、成本高、需标准品、低浓度产物难以定量等问题，且文献中檀香烯合酶（如SaSSy）的动力学参数存在巨大争议（kcat相差达40倍）。
关键发现：建立了焦磷酸标准曲线（1-60 μM），斜率是磷酸标准曲线的2倍 等 7 条