核心问题：工业发酵中酿酒酵母常面临氧化、乙醇、低温等非生物胁迫，导致发酵效率下降。如何通过基因工程提高酵母的胁迫耐受性和发酵产量，尤其低温发酵性能，是核心问题。
关键发现：TG细胞在30°C发酵84 h最终酒精浓度13.3% (0.63±0.03 g/g)，比WT的10.2% (0.48±0.04)提高23% 等 6 条
核心问题：从红平红球菌WZ010中鉴定并表征一种立体特异性乙偶姻(联乙酰)还原酶(ReADR)，用于合成光学纯的(2S,3S)-2,3-丁二醇，并开发单酶偶联体系实现辅酶原位再生及双手性醇的同步制备。
关键发现：红平红球菌WZ010在酒精发酵中产生光学纯(S)-乙偶姻和(2S,3S)-2,3-丁二醇（<0.5 mM）。adr基因长780 bp，编码259个氨基酸，亚基分子量26,864，天然为同源二聚体（约70,000）。纯化酶比活力9.16 U/mg（二乙酰还原），纯化4.0倍。最适还原条件为pH 等 5 条
核心问题：野生型Leifsonia xylii HS0904来源的羰基还原酶(LXCAR)催化3,5-双(三氟甲基)苯乙酮(BTAP)不对称还原生成(R)-BTPE时底物浓度低、催化效率不足，难以满足工业应用需求。
关键发现：重组LXCAR粗酶比活为1.54 U/mg，比野生型L. xylii HS0904粗酶(0.0249 U/mg)高62倍 等 4 条
核心问题：稀有皂苷notoginsenoside ST-4在天然植物中含量极低（仅0.00066%），缺乏简便高效的制备方法，本研究旨在建立一种利用重组酶从vina-ginsenoside R7转化制备ST-4的绿色便捷途径。
关键发现：['HaGH03由749个氨基酸组成，属于第3家族糖苷水解酶，与嗜热β-葡萄糖苷酶B具有48%的同一性，其预测催化活性位点为Asp233（亲核试剂）和Glu423（酸/碱）', '以pNPG为底物时KM=5.67±0.24 μM，kcat=69.2±0.31 /s 等 3 条
核心问题：天然卤醇脱卤酶（HHDH）的催化活性难以满足工业应用需求，需要定向进化提高其性能，但缺乏简单、灵敏且适用于全细胞的高通量筛选方法。
关键发现：建立的叠氮比色法摩尔吸光系数ε460=1.2173×10^4 L mol−1 cm−1，线性检测范围0–2 mM叠氮 等 5 条
核心问题：阐明类胡萝卜素1,2-水合酶（CrtC）催化加水的分子机制，鉴定关键催化残基。
关键发现：鉴定的关键残基H239、W241、Y266、D268（RgCrtC编号）全部被丙氨酸替换后酶活完全丧失 等 6 条
核心问题：将来源于Lactobacillus helveticus ATCC 12046的两种外肽酶PepN和PepX构建成融合蛋白，以在一个分子中结合其协同水解活性，提高分子量以利于酶膜反应器应用，并改善酶的生化特性。
关键发现：成功构建融合蛋白FUS-PepN-PepX（理论分子量188.3 kDa，SDS-PAGE约190 kDa），在E. coli BL21(DE3)中可溶/不溶比例约1:1。生物反应器培养最高体积酶活达248 μkat/L（FUS-PepN）和228 μkat/L（FUS-PepX），最高比活分... 等 3 条
核心问题：柠檬烯目前主要作为柑橘汁工业的副产物获得，但产量和品质波动，且可能无法满足新型大宗应用（如生物材料、溶剂、燃料）的需求，因此需要开发微生物发酵生产柠檬烯的替代途径，并解决产量低和毒性等问题。
关键发现：['目前最高柠檬烯产量为E. coli中达到1.35 g/L（Willrodt et al. 2014）', '去除柠檬烯合酶转运肽可使酵母中柠檬烯产量提高4至8倍', '表达Alcanivorax borkumensis外排泵使E. coli柠檬烯产量提高30%', '使用邻苯二甲酸二丁酯覆...
核心问题：环状三萜（如环阿屯醇和β-香树脂醇）被认为是无法在大肠杆菌中产生的，此前也没有在大肠杆菌中生产这类化合物的报道，尽管它们具有重要的工业价值。
关键发现：['成功在大肠杆菌中生产出环阿屯醇（GC保留时间22.7 min）和β-香树脂醇（GC保留时间22.0 min），经质谱鉴定与标准品一致。', '未检测到中间产物2,3-氧化鲨烯，推测其不稳定并迅速被OSC转化为环状三萜。', '基因顺序为HpIDI、AtSQS、AtSQE时（pAC-HpID... 等 2 条
核心问题：解析Streptomyces peucetius ATCC 27952的完整基因组，系统挖掘其次级代谢产物生物合成基因簇和生物催化酶资源，为菌株代谢工程改造和生物催化应用提供基因组学基础。
关键发现：基因组大小8,023,114 bp，G+C含量70.6%，约87%为蛋白编码区，包含7187个蛋白编码基因、18个rRNA、66个tRNAs和3个非编码RNA 等 9 条
核心问题：提高宏基因组β-糖苷酶MeBglD2的热稳定性，以改善其在植物生物质糖化中的应用性能。
关键发现：野生型MeBglD2在56°C处理30min几乎完全失活，H8L、N59C、A295G单突变体分别保留13%、63%和61%活性 等 3 条
核心问题：异戊二烯合酶（IspS）天然活性低，缺乏高通量筛选高活性IspS突变体的简单快速方法，限制了异戊二烯生物合成的工业化应用。
关键发现：FACS分析显示，添加10 μM DMAPP后，高荧光阳性细胞比例从34.9%降至21.7%（降低38%），最高eGFP荧光强度从10^5降至10^4 等 4 条
核心问题：在3N5M转氨酶亚家族中寻找具有高操作稳定性的胺转氨酶，并探究四聚体组装与酶稳定性之间的关联。
关键发现：TA-10对1-苯乙胺与丙酮酸的转氨活性达6 U/mg，熔解温度在储存条件下高达87-88°C，操作条件下为77.9-81.8°C 等 5 条
核心问题：表征Aromatoleum aromaticum EbN1中基因ebA3166编码的苄醇脱氢酶（BaDH）的生化功能，揭示其独特的pH依赖性氧化还原辅因子特异性，并探索其在酶级联反应中将有机酸还原为醇类的生物催化应用潜力。
关键发现：['重组BaDH经Strep亲和纯化后比活力为71 U/mg，总活力1050 U，总蛋白14.8 mg（来自10 g湿菌体）', 'BaDH为同源四聚体（天然分子量164 kDa，亚基41.4 kDa），每亚基含1.34个Zn原子和0.37个Fe原子', '辅因子特异性呈pH依赖：NADP+催... 等 5 条
核心问题：缺乏高效制备稀有齐墩果烷型人参皂苷的方法，尤其是选择性水解C-28位葡萄糖酯键的生物催化剂。
关键发现：P/GH3由749个氨基酸组成，分子量89.5 kDa。以pNP-β-D-Glc为底物时最适pH 8、最适温度50℃ 等 3 条
核心问题：如何通过基因工程手段持久高效地提高丹参中丹参酮IIA、迷迭香酸和紫草酸B等活性次生代谢产物的含量，以替代外源茉莉酸甲酯诱导的短期效果。
关键发现：克隆的SmAOC cDNA全长910 bp，ORF 738 bp，编码245个氨基酸，预测分子量26.795 kDa，含123 bp内含子。在E. coli中表达重组SmAOC蛋白约45 kDa（含18 kDa标签），验证SmAOC可增强E. coli盐耐受性。MeJA处理2 h时SmAOC表... 等 3 条
核心问题：苔藓植物中查尔酮合酶的功能尚未被详细表征，该研究旨在从地钱纲植物 Plagiochasma appendiculatum 中克隆并鉴定查尔酮合酶 PaCHS，探究其生化特性及在黄酮生物合成中的作用。
关键发现：从 P. appendiculatum 克隆的 PaCHS 基因 ORF 长 1236 bp，编码 411 个氨基酸残基，与其它植物的查尔酮合酶一致性为 60-70%。重组 PaCHS 能以 p-香豆酰-CoA 和丙二酰-CoA 为底物体外生成 naringenin，产物 m/z 为 271。... 等 6 条
核心问题：雷公藤中雷公藤甲素（triptolide）等二萜类化合物的生物合成途径尚不清楚，尤其是催化二萜共同前体牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸（GGPP）合成的GGPPS基因未被鉴定。
关键发现：克隆了5个新的TwGGPPS全长cDNA（TwGGPPS1/3/4/5/6）并连同此前克隆的TwGGPPS2共6个基因 等 5 条
核心问题：解析洗发姜（Zingiber zerumbet）中zerumbone生物合成的关键酶——α-humulene合酶，并实现其在大肠杆菌中的异源表达与产物生产。
关键发现：['ZSS1 cDNA开放阅读框长1,644 bp，编码548个氨基酸，预测分子量64.5 kDa，等电点5.25', 'ZSS1氨基酸序列与已知倍半萜合酶一致性为34%-63%，与生姜germacrene D合酶相似性最高（63%）', '重组ZSS1酶催化FPP生成α-humulene（9... 等 2 条
核心问题：实现D-阿洛酮糖-3-差向异构酶（DPE）在大肠杆菌中的高水平胞外分泌表达，以简化下游处理并提高D-阿洛酮糖生产效率。
关键发现：摇瓶优化后总DPE活性达3.96 U/mL（1.5 mM IPTG诱导），胞外活性1.70 U/mL 等 3 条