共 480 篇
核心问题：调查细菌中类胡萝卜素裂解双加氧酶（CCO）同源物的分布与功能，鉴定非类胡萝卜素底物的CCO同源酶，并阐明其氧化裂解反应机制（单加氧酶还是双加氧酶）。
关键发现：NOV1和NOV2在体内16 h内将白藜芦醇完全降解，产生4-羟基苯甲醛和3,5-二羟基苯甲醛；体外实验中，1 mM（68.5 μg）白藜芦醇在20 min内被完全裂解，1 mM（73.3 μg）piceatannol在60 min内完全裂解，1 mM（77.4 μg）rhapontigeni...
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酶学与微生物学
carotenoidsenzymesmicrobiologyoxygenasesphytohormones
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BW27...
核心问题：阐明苯丙内酯（Phenylalilactone）类抗生素生物合成中相关基因和酶的功能，特别是γ-丁内酯环形成、羟基化、乙酰化等关键修饰步骤的催化机制。
关键发现：plaO2、plaU和plaZ基因失活后产物谱与野生型一致，表明这些基因不参与已知PL衍生物的生物合成；plaO3失活产生新型化合物PL HS6（m/z
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合成生物学
Streptomycesnatural productsoxygenasesphenalinolaconeterpenoids
Streptomyces sp. Tu6071
Streptomyces sp. Tu6071
Streptomyces sp. Tu6071
核心问题：细菌中缺乏能直接催化香叶基二磷酸(GPP)转化为单萜的环化酶，此前仅报道过倍半萜环化酶和以2-甲基GPP为底物的2-甲基异冰片合酶，尚未发现直接利用GPP的细菌单萜环化酶。
关键发现：CnsA与已知细菌倍半萜环化酶（pentalenene synthase）有34%氨基酸序列一致性
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合成生物学
Streptomyces clavuligerusbiosynthesisgenome miningmonoterpene cyclaseterpenoids
Streptomyces clavulig...
Streptomyces lividans...
Escherichia coli BL21...
核心问题：细菌中萜类环化酶研究较少，利用基因组挖掘发现新型细菌倍半萜环化酶。
关键发现：从4 L培养物中分别纯化得到(-)-germacradien-4-ol (9.8 mg)和(-)-epi-α-bisabolol (14.0 mg)
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合成生物学
Streptomyces citricolorcyclizationgenome miningsesquiterpene cyclasesterpenoids
Streptomyces citricol...
Streptomyces lividans...
Streptomyces lividans...
核心问题：从链霉菌基因组中挖掘并表征新的细菌二萜环化酶，鉴定合成西松烷骨架的酶。
关键发现：从Streptomyces sp. SANK 60404基因组中鉴定出两个新的I类二萜环化酶DtcycA（371 aa）和DtcycB（343 aa），两者均含NSE基序，与CotB2的序列一致性仅14%和19%
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合成生物学
反应机理环化生物合成萜类化合物链霉菌
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Streptomyces sp. SANK...
核心问题：发现和表征具有新底物特异性的自足型细胞色素P450单加氧酶，特别是能催化非活化C-H键区域和立体选择性羟基化的酶。
关键发现：通过基因组挖掘发现并鉴定了来自Labrenzia aggregata IAM 12614的自足型P450单加氧酶CYP116B4（P450LAMO），其与P450RHF和P450SMO分别有60%和62%的同源性。纯化后的P450LAMO对p-氯硫代苯甲醚的比活力为7.0 U g^-1，较粗提...
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生物催化
cytochromesdata mininghydroxylationoxidoreductasesprotein engineeringsubstrate promiscuity
Escherichia coli BL21...
核心问题：鉴定两个链霉菌来源的推定异戊烯基转移酶SAML0654和Strvi8510的生化功能，并阐明其底物特异性。
关键发现：SAML0654和Strvi8510被鉴定为6-二甲基烯丙基色氨酸合酶（6-DMATS），二者序列一致性为63%。以L-色氨酸和DMAPP为底物时，SAML0654和Strvi8510的产物产率分别为59.4%和42.2%。L-色氨酸是最佳底物，Km=0.018 mM，kcat=0.30 s⁻...
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合成生物学
Streptomycesdimethylallyltyrptophan synthases enzymeshydroxynaphthalenesindole prenyltransferasesnatural products
Escherichia coli M15
Escherichia coli BL21...
核心问题：野生型 CmOYE 对中间体 (4S)-phenol 的催化活性低，导致一锅两步还原合成 (4R,6R)-actinol 时中间体积累，产物收率仅 67.2%。
关键发现：CmOYE 与底物类似物 p-HBA 复合物晶体结构分辨率为
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代谢工程 / 合成生物学
X-ray crystallographybiocatalysisenzyme catalysisenzymesold yellow enzyme
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
核心问题：细菌P450对倍半萜衍生化的潜力尚未被充分研究；本文旨在比较CYP260A1和CYP264B1对不同结构倍半萜的底物特异性和区域选择性，拓展细菌P450在倍半萜选择性氧化中的应用。
关键发现：CYP260A1氧化(+)-nootkatone时62%底物被消耗，主产物4-hydroxynootkatone选择性61%
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代谢工程
cytochromesenzyme catalysishydroxylationregioselectivityterpenoids
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli C43(...
Escherichia coli
核心问题：细菌中二萜类化合物稀少，需要发现和鉴定细菌来源的新二萜生物合成基因簇及其产物。
关键发现：Haur_2145与Rv3377c氨基酸序列同一性为29%，含有DxDD motif（311-314位DGDD）
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合成生物学
Herpetosiphon aurantiacusditerpene cyclasesditerpene synthasesnatural productsterpenoids
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
核心问题：缺乏快速有效的方法获得具有互补立体选择性的 Old Yellow Enzyme (OYE) 变体对，以控制不对称氢化反应的面选择性；现有蛋白质工程策略筛选工作量大，且立体互补的野生型 OYE 极为稀少和底物特异。
关键发现：通过支架取样策略，仅构建了14个异源表达变体，即可获得多个高效立体互补的烯还原酶催化剂。对底物1（3-甲基环己-2-烯-1-酮），TsER C25D/I67T 转化率达95%，TOF为190 h⁻¹
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合成生物学
ene reductasesenzyme based stereocontrolprotein engineeringresidue transferscaffold sampling
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
核心问题：解析双功能三萜/倍半萜环化酶（TC）如何针对不同底物（C35的tetraprenyl-β-curcumene和C30的squalene）产生不同的环化模式，特别是Tyr167在角鲨烯环化中终止于双环步骤的作用。
关键发现：野生型TC催化角鲨烯(3)产生双环产物4（85.8%）、四环产物5（9.5%）和五环产物6（4.7%），但无化合物10。Y167A突变显著改变产物分布：4降至24.2%，5升至20.2%，6升至32.1%，并产生23.6%的新三环化合物10。Y167L、Y167F、Y167W突变体仅产生少量1...
代谢工程
oncoreoids环化生物合成萜类酶
Bacillus megaterium
Escherichia coli BL21...
核心问题：高效合成纯的D-甘油酸-2-磷酸，因为该代谢物是多种代谢通路的关键中间体，化学合成路线步骤多、纯度低，需要开发直接、高选择性的酶法磷酸化方法。
关键发现：重组甘油酸-2-激酶对D-甘油酸具有严格对映选择性，L-甘油酸不被磷酸化
等 2 条
合成生物学
D-Glycerate-2-phosphateGlycerate-2-kinaseasymmetric biocatalysischiral metaboliteenzymatic phosphorylation
Escherichia coli BL21...
Thermotoga maritima
核心问题：如何通过改造鲨烯藿烯环化酶（SHC）的活性位点，实现萜烯底物（如法尼醇）与醇类亲核试剂的分子间偶联，生成非天然的醚类萜类化合物。
关键发现：野生型AacSHC对法尼醇（1）的转化率为64%，产物4（45%）、2（3%）、3（7%）、5（9%）
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酶工程 / 合成生物学
active site mutagenesiscyclizationether formationintermolecular reactionsqualene hopene cyclase
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
核心问题：开发一种快速、可靠的高通量筛选方法，用于从萜烯合酶突变体文库中筛选出高产突变体，克服传统GC-MS方法通量低、样品制备繁琐的局限。
关键发现：PTR-Qi-ToF-MS与GC-MS在瓦伦烯产量排名上具有良好一致性（R²>0.95）
等 5 条
代谢工程
PTR-MSVOCshigh throughput screeningsesquiterpenevalencene
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
核心问题：微生物发酵法生产异丁醇等高级醇存在产物毒性低耐受、底物通量低以及代谢网络复杂难以优化等问题，限制了其经济可行性。
关键发现：25 mM葡萄糖经6酶级联在19 h内生成28.7 mM乙醇，摩尔产率57.4%
等 7 条
代谢工程
alcoholsbiocatalysisbiosynthesisbiotechnologyenzymes
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
核心问题：非传统来源（菠萝蜜种子）淀粉的生物乙醇生产过程中，缺乏高效且可分泌表达的生淀粉降解α-淀粉酶，且传统淀粉液化和糖化过程能耗高。
关键发现：克隆的 blamy-I 基因全长 1539 bp，编码 512 个氨基酸，成熟蛋白 Blamy-I 含 483 个氨基酸，SDS-PAGE 显示分子量约
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发酵工程
Bacillus licheniformisBioethanolJackfruit seed starchRaw starch digesting α-amylaseRecombinant DNA
Bacillus licheniformi...
Escherichia coli BL21...
核心问题：阐明工程化CRABPII残基在视黄醛质子化席夫碱形成中的精确作用，特别是Lys132、Tyr134、Arg111和Glu121四个残基在亚胺形成和质子化中的角色。
关键发现：野生型CRABPII对全反式视黄酸的结合亲和力为2.0±1.2 nM
等 8 条
蛋白质工程
Burgi-Dunitz angleSchiff basecellular retinoic acid binding proteinordered water networkrhodopsin protein mimic
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
核心问题：解析枯草芽孢杆菌来源的细胞色素P450单加氧酶CYP102A1突变体对(-)-α-蒎烯和(-)-β-蒎烯区域选择性的分子基础，特别是宽大活性口袋中底物锚定效应如何决定产物分布。
关键发现：GVQ突变体催化(-)-α-蒎烯生成pinene oxide 70%、verbenol 20%、myrtenol 10%（NADPH氧化速率113 min⁻¹，偶联率28%）
等 3 条
合成生物学 / 计算酶学
CYP102A1 monooxygenasemolecular dynamics simulationmutantspinene
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
核心问题：真菌Trichodiene synthase在大肠杆菌中的表达量极低（仅占总蛋白的0.05-0.1%），难以获得足量酶蛋白用于深入的机制和结构研究。
关键发现：重组trichodiene synthase表达量达可溶蛋白的20-30%（占总细胞蛋白30%）
等 6 条
代谢工程
Escherichia coliFarnesyl diphosphateFusarium sporotrichioidesOverexpressionSesquiterpene cyclaseT7 expression system
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...
Escherichia coli BL21...