核心问题：在E. coli BL21(DE3)中高效表达来自Thermobifida fusca KW3的高度疏水PET水解羧酸酯酶TfCa，克服密码子偏好差异、包涵体形成和疏水蛋白毒性等表达障碍。
关键发现：密码子优化后，胞内酯酶活性提高5倍，培养基中活性提高约3倍 等 5 条
核心问题：研究气相CO2浓度对双相E. coli发酵中琥珀酸生产的影响，阐明CO2利用过程的限制因素
关键发现：随着气相CO2浓度从0%增至50%，琥珀酸比生产速率从1.9 mg/g·h增至225 mg/g·h，质量产率从0.04 g/g增至0.75 g/g 等 4 条
核心问题：呼吸缺陷型工程酿酒酵母在单独以木糖为碳源时无法维持发酵活性，但在葡萄糖与木糖混合底物下能否保持高效乙醇生产？
关键发现：葡萄糖重复批次发酵中，乙醇产率接近理论值0.46 g/g，体积乙醇生产率从7.5 g/L/h提升至8.3 g/L/h 等 3 条
核心问题：木质纤维素水解酶成本高，且酿酒酵母不能利用木糖，导致半纤维素原料直接发酵产乙醇效率低。
关键发现：重组菌株MN8140/XBXX在72h发酵后乙醇产量为8.2 g/L，是对照菌株MN8140/X（3.0 g/L）的约2.5倍 等 3 条
核心问题：酿酒酵母在高浓度糖和醇类条件下耐受性不足，限制了生物燃料的经济生产。需要鉴定能够提高酒精耐受性的内源基因靶点。
关键发现：过表达INO1、DOG1、HAL1或截短MSN2均显著提高酵母对5%乙醇和1%异丁醇的耐受性；在含5%乙醇和10%葡萄糖条件下，INO1过表达菌株比生长速率较对照提高约3.4倍（0.093 h⁻¹ vs 等 4 条
核心问题：重组酿酒酵母在木糖代谢中存在辅因子不平衡（XR偏好NADPH，XDH依赖NAD+），导致大量副产物木糖醇积累，乙醇产率低，制约木质纤维素乙醇商业化。
关键发现：氧气限制发酵中，重组菌SX6^MUT的木糖消耗速率为0.64 g/L/h，乙醇生产力为0.25 g/L/h，乙醇产率为39%（基于消耗木糖），分别为仅表达XR^MUT、XDH和XK菌株的1.8倍、4.2倍和2.2倍 等 5 条
核心问题：利用Pleurotus sapidus的双加氧酶对(+)-car-3-ene进行区域和立体选择性氧化，以获得有价值的萜类香料化合物，并阐明其与自氧化不同的酶催化机制。
关键发现：生物转化4 h后，主要产物car-3-en-5-one [V]积累至25.3 mg/L，car-3-en-2-one [VII]为5.4 mg/L，car-2-en-4-one [XV]为7.3 mg/L 等 3 条
核心问题：使用H2作为还原剂，实现高效、无副产物的辅因子再生，用于不对称酮还原。
关键发现：双细胞系统初始反应速率达450 μmol h-1 g-1（基于G. oxydans用量），是单细胞2-丁醇系统（266 μmol h-1 g-1）的近2倍 等 6 条
核心问题：植物天然产物在自然来源中含量低、化学合成不经济，急需开发微生物细胞工厂实现其高效、可持续生产
关键发现：综述了多种植物天然产物的微生物合成进展。异戊二烯：Synechocystis中达50 mg/g DCW/day 等 4 条
核心问题：大分子人参皂苷难以被人体直接吸收，需要转化为稀有皂苷；但传统转化方法效率低、副产物多。因此需要寻找能高效、选择性水解人参皂苷糖基的酶。
关键发现：bglSp基因全长1344 bp，编码447个氨基酸，预测分子量为49,399 Da；重组BglSp对pNP-β-D-葡萄糖苷的Km为2.9±0.3 mM，Vmax为515.4±38.3 μmol/min/mg；最适pH为5.0，最适温度为37°C；在pH 等 3 条
核心问题：降低生物柴油生产中的酶催化剂成本，通过产生稳定且高表达的截短CALB酶并固定化，用于植物油与醇的酯交换反应。
关键发现：在酿酒酵母中表达了截短CALB，检测到5种截短变体，其中33.8-kD蛋白表达量最高，细胞沉淀中达4.85 mg/10 mL，上清1.5 mg/10 mL，且上清中每mg酶的酯产率比沉淀高3.4-4.5倍。固定化截短CALB催化玉米油乙酯产量比大豆油高4倍 等 2 条
核心问题：木质纤维素联合生物加工（CBP）中，水解酶产量不足导致乙醇生产效率低下，需要提高关键水解酶（木聚糖酶）的表达水平以增加糖供应和乙醇产量。
关键发现：转化获得12株潮霉素抗性菌株，其中Fx10和Fx13在葡萄糖为唯一碳源的抑制条件下胞外木聚糖酶活最高分别达250 nkat/mL和230 nkat/mL（野生型仅痕量）。Southern blot证实转化株至少含有额外2个xylanase 2基因拷贝。在葡萄糖培养中，转化株xylanase 2... 等 4 条
核心问题：主要人参皂苷（Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1）在人体胃肠道吸收差，需转化为更易吸收且药理活性更强的稀有皂苷（如F1），但缺乏高效、特异且可重组表达的转化酶，尤其是能选择性将Rg1转化为F1的克隆酶。
关键发现：基因bgISk长1857 bp，编码618个氨基酸，属于糖苷水解酶家族3 等 4 条
核心问题：植物基因工程中广泛使用的单一启动子（如CaMV35S）在多基因叠加表达时易引发基因沉默和遗传重组，亟需开发活性更强、性质可控的新型嵌合启动子作为替代。
关键发现：在烟草原生质体中，MUASMSCP启动子的GUS活性是MUAS35SCP的1.1倍、CaMV35S的1.5倍 等 5 条
核心问题：酿酒酵母不能代谢果胶的重要单体D-半乳糖醛酸，需引入细菌D-半乳糖醛酸代谢途径以利用果胶丰富原料生产乙醇等产品。本研究旨在实现该细菌途径前两步酶（D-半乳糖醛酸异构酶和D-塔格糖醛酸还原酶）在酿酒酵母中的功能性表达。
关键发现：D-塔格糖醛酸还原酶（L. lactis uxaB）在酿酒酵母中获得高表达，细胞提取物活性为6.3±0.5 μmol min^-1 mg^-1蛋白。在六个密码子优化的细菌uxaC基因中，L. lactis来源的D-半乳糖醛酸异构酶活性最高（0.46±0.05 μmol min^-1 mg^-1... 等 2 条
核心问题：研究γ-PGA产生菌B. subtilis ZJU-7在发酵后期高粘度、低溶氧条件下主要副产物（acetoin和2,3-丁二醇）对菌体生长及γ-PGA合成的影响，并揭示不同pH值下代谢通量再分配与γ-PGA产量的关系。
关键发现：在pH 等 8 条
核心问题：Xanthophyllomyces dendrorhous 作为天然产虾青素的酵母，尚未被用于异源表达萜类环化酶；需验证其作为萜类化合物生产平台的潜力。
关键发现：所有 PSS 表达菌株均能产生 pentalenene，野生型及敲除菌株无该产物；GC-MS 鉴定 pentalenene 特征碎片 m/z 204（68%）和 m/z 189（47.6%）。ΔcrtE-PSS 和 ΔcrtYB-PSS 产量为 等 4 条
核心问题：在毕赤酵母中，不同发酵工艺条件（甲醇限制、碳源切换、氧限制）下AOX1启动子调控和过氧化物酶体生物发生的差异，及其对重组蛋白生产的影响。
关键发现：['ML条件下Ub-R-GFP荧光强度从诱导起点0增至36h的630.7±73 RFU，随后84h降至459.0±45 RFU 等 3 条
核心问题：缺乏对重组工业酿酒酵母在高温下利用木糖生产乙醇的转录组理解，需要鉴定与高温乙醇生产相关的关键基因和调控机制。
关键发现：在38°C发酵中，最佳菌株sun049T产乙醇15.2 g/L，达到理论产量的63% 等 5 条
核心问题：提高乳酸乳球菌乙醇脱氢酶LlAdhA对非天然底物异丁醛的还原活性，以改善异丁醇生物合成途径中最后一步的效率。
关键发现：LlAdhA^RE1（含Y50F、I212T、L264V突变）相比野生型，对异丁醛的K_M降低约7倍，催化效率(kcat/KM)提高约30倍。在结构引导的饱和突变基础上获得四重突变体LlAdhA^29C8（Y50F/N110S/I212T/L264V），其对异丁醛的K_M较野生型降低约17倍（...