核心问题：重组酿酒酵母在气升式生物反应器中连续生产GM-CSF时面临质粒不稳定导致产物产量下降的问题，需研究连续培养动力学及操作策略以改善质粒稳定性和产物合成。
关键发现：连续培养可持续150 h以上，质粒携带细胞比例降至约20% 等 5 条
核心问题：环孢素A的工业生产菌株Tolypocladium inflatum缺乏遗传改良研究，产量和持续生产能力有待提高。
关键发现：用0.15M环氧氯丙烷处理分生孢子150分钟后分离得到菌株M6 等 6 条
核心问题：现有用于农药残留检测的乙酰胆碱酯酶（AChE）存在来源有限、灵敏度低、稳定性差等缺陷，需要一种可低成本大量生产且对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂具有高灵敏度的重组AChE。
关键发现：重组菌株最高表达量达180 U/mg总蛋白 等 6 条
核心问题：研究生理和培养条件（碳源、pH、培养基组成）对克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）异源蛋白（葡糖淀粉酶）生产的影响，并优化生产条件。
关键发现：摇瓶培养中，乳糖是最好的碳源，但碳源未被完全消耗，pH降至3.0-3.5，酶活峰值后24h内下降近一半；在pH 等 3 条
核心问题：单萜合酶转基因烟草能否改变植物气味，以及这种改变是否可被人类嗅觉感知
关键发现：三角试验中20名参与者共40次试验，22次正确选择，Z=2.91（临界值1.645），P<0.05，表明人可显著区分BCD转基因烟草与SR1野生型叶片的气味 等 4 条
核心问题：利用葡聚糖蔗糖酶的受体反应合成水杨苷类似物，并评价其抗凝血活性。
关键发现：利用水杨苷、水杨醇和苯酚作为受体，分别产生超过15、9和3种受体产物 等 2 条
核心问题：细胞色素P450酶具有广泛的底物范围和多样的化学反应性，但其复杂性、不稳定性和低活性限制了其工业生物技术应用。本文综述了P450系统的结构-功能关系、催化机制及通过蛋白质工程提高其催化性能以促进生物技术应用的研究进展。
关键发现：已克隆超过5000个P450基因 等 10 条
核心问题：全细胞生物催化效率低，底物/产物毒性及水溶性差，常用有机溶剂损伤细胞膜，影响过程效率与选择性。
关键发现：使用离子液体双相体系进行不对称还原，化学产率从<50%提高至80-90% 等 7 条
核心问题：重组牛肠激酶轻链（EK_L）在毕赤酵母中表达水平低、成本高，限制了其应用。
关键发现：Mut^s菌株的EK_L表达量显著高于Mut^+菌株 等 9 条
核心问题：乳糖是乳清中的主要固体成分，但其直接利用困难；酵母β-半乳糖苷酶为胞内酶，提取和下游加工成本高，限制了工业应用。需要构建能利用乳糖且易于释放胞外蛋白的重组酵母菌株。
关键发现：LHDP1菌株在YPL-4%乳糖培养基中乳糖消耗23.7 g/l（143 h），YPL-6%中20.39 g/l（168 h） 等 3 条
核心问题：研究添加萜类生物合成前体对银杏细胞培养中白果内酯（bilobalide）和银杏内酯（ginkgolides）积累的影响，并阐明其生物合成途径的调控机制。
关键发现：HMG-CoA处理使细胞中GA含量增加4.25倍，最大产量34.3 mg/g DW 等 11 条
核心问题：基因剂量和甲醇利用（Mut）表型对毕赤酵母重组蛋白生产的联合影响尚未被系统研究
关键发现：Muts单拷贝菌株的比生产率和YP/X分别比Mut+单拷贝菌株高1.29倍和2.34倍 等 2 条
核心问题：提高Leuconostoc pseudomesenteroides将果糖转化为甘露醇的产率，减少果糖向磷酸酮醇酶途径的泄漏，从而提升甘露醇的产量和生产效率。
关键发现：突变株BPT143的果糖激酶比活为0.06 U/mg（野生型为0.49 U/mg） 等 7 条
核心问题：利用食品安全级的乳酸乳球菌作为宿主，实现高效微生物法生产木糖醇，避免使用具有致病性的Candida菌株，并达到与其相当的生产效率。
关键发现：['在LLXR菌株中，木糖还原酶最大活性为1.8 μmol min^-1 mg^-1（以NADH为底物），NADH/NADPH活性比为0.64。', '共表达菌株LLXTXR的最大木糖还原酶活性为1.3 μmol min^-1 mg^-1，最大[U-14C]木糖积累量为3.0 nmol OD^...
核心问题：研究不同水平的NADH可用性对大肠杆菌在限定培养基恒化培养中代谢通量分布的影响，探索通过调节NADH/NAD+辅因子对来重定向代谢通量的策略。
关键发现：['过表达NAD+依赖FDH后，三种碳源下的NADH产量和NADH/NAD+比值均高于对照，总NAD(H+)水平在各组合间相似', '乙醇/乙酸比值从对照菌株在葡萄糖中的1.05增加到表达异源FDH菌株在山梨醇中的9.45', '乙酸比产率在葡萄糖酸+对照菌株中最高，约为山梨醇+FDH菌株最低... 等 3 条
核心问题：在长春花（Catharanthus roseus）毛状根中，单独表达反馈不敏感的邻氨基苯甲酸合酶α亚基（trp5）或色氨酸脱羧酶（TDC）不能显著提高萜类吲哚生物碱（TIA）产量，因为缺乏ASβ亚基导致全酶活性受限，且内源TDC活性不足。
关键发现：诱导后，trp5:ASB1毛状根系（ASαβ1）的AS活性较未诱导提高2.2倍，trp5:ASB1:TDC（ASαβT2）提高2.7倍 等 3 条
核心问题：雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）中β-胡萝卜素酮化酶（bkt）基因的数量及其在不同胁迫条件下调节虾青素合成的机制尚不清楚。
关键发现：雨生红球藻NIES-144同时含有bkt1、bkt2和bkt3三个β-胡萝卜素酮化酶基因。bkt3为新的第三个基因，与bkt2核苷酸序列有95%同源性（编码区仅22个核苷酸差异，导致2个氨基酸差异）。bkt3在大肠杆菌中异源表达能将β-胡萝卜素转化为海胆酮和角黄素，但不能合成虾青素。氮缺乏单独... 等 2 条
核心问题：在酿酒酵母中，重组前体通路（R-3-羟基丁酰-CoA）的不同组合如何影响PHB合成速率和积累水平。
关键发现：仅表达PHB合酶（菌株S）时PHB含量约0.2%细胞干重（CDW）；共表达合酶和还原酶（菌株RS）后PHB含量提高约18倍至约3.5% CDW；三者共表达（菌株RKS）时PHB含量达到约9% CDW，比菌株S高45倍。最大比PHB合成速率分别为：菌株S 等 4 条
核心问题：在低溶解氧条件下，Torulopsis glabrata中NADH不能完全氧化再生为NAD+，导致NAD+供应不足，限制了糖酵解通量和丙酮酸生产率。
关键发现：补充8 mg/L烟酸使葡萄糖消耗率和丙酮酸浓度分别提高48.4%和29%（相对4 mg/L对照） 等 5 条
核心问题：如何通过过表达ppt1基因提高裂殖酵母中泛醌-10（辅酶Q10）的产量，并考察其表型变化及实现大规模高细胞密度发酵。
关键发现：过表达MTppt1和ERppt1使裂殖酵母泛醌-10含量分别提高3.7倍和5.1倍 等 2 条