核心问题：在水-有机两相体系中酶法合成辛基-β-D-半乳糖吡喃糖苷时，酶稳定性差、乳糖水解活性高、产物合成速率慢且产率低，限制了规模化生产。
关键发现：孢子展示的β-Gal在50%(v/v) DME中活性保留154% 等 6 条
核心问题：如何实现生淀粉直接发酵生产乙醇，并在重复批次发酵中保持淀粉酶活性，从而降低生物乙醇生产成本。
关键发现：改造后的α-淀粉酶SBAI展示菌株在200 g/l生玉米淀粉发酵120 h产乙醇46.5 g/l，为天然α-淀粉酶菌株（30.9 g/l）的1.5倍 等 3 条
核心问题：开发适合酵母表面展示的内切葡聚糖酶，并构建组合细胞系统高效生产纤维素乙醇，解决单一细胞共展示多种纤维素酶导致的代谢负担和表达优化困难问题。
关键发现：T. reesei EGII在整体pH范围（除pH9外）具有最高的CMC降解活性，最适pH约3-4 等 2 条
核心问题：高效酶法将甜菊苷（stevioside）转化为甜茶苷（rubusoside），并利用甜茶苷提高难溶性药物（甘草苷和替尼泊苷）的水溶性，以解决药物口服吸收差和生物利用度低的问题。
关键发现：重组乳糖酶（rβ-GLYPI）在E. coli中表达后，经Ni-NTA纯化，比活力为66.8 U/mg，纯化12.4倍，回收率56.7% 等 6 条
核心问题：水稻内源合成辅酶Q9（CoQ9），而具有更高商业价值的辅酶Q10（CoQ10）无法在水稻中合成。如何通过代谢工程改造异戊二烯侧链长度，使水稻主要生产CoQ10。
关键发现：S14:ddsA转基因水稻叶片中CoQ10含量为40-70 μg/gFW，是非转基因对照的11-18倍 等 5 条
核心问题：在大肠杆菌中分离影响类胡萝卜素产量的染色体突变，并阐明突变是否通过改变ColE1型质粒拷贝数发挥作用。
关键发现：深黄色突变株（Y1、Y8、Y12、Y15、Y17）β-胡萝卜素产量为亲本的2-3倍，质粒拷贝数增加2-4倍 等 2 条
核心问题：通过替换C. cellulovorans纤维素酶复合物（cellulosome）中dockerin模块的识别位点氨基酸，研究其对cohesin-dockerin相互作用亲和力的影响，并利用该策略提高基于cohesin的生物标记在蛋白质组学检测中的灵敏度。
关键发现：荧光强度分析显示，EngE Al和EngH Al突变体与Coh2/Coh9的结合分别增强1.4-2.2倍，而ExgS SM突变体结合降低0.6-0.7倍 等 4 条
核心问题：如何在转基因水稻种子中提高外源基因产物的积累水平，同时减少选择标记基因带来的食品安全担忧和组成型表达对产量的负面影响。
关键发现：含CSP:mALS的转基因水稻种子中乳铁蛋白积累量为含35S:HPT的约120%-200%（平均约1.4倍），具体：两拷贝6LacQR为1.40倍，三拷贝6LacQR为1.25倍，单拷贝12Lac为2.08倍，双拷贝12Lac为1.19倍 等 4 条
核心问题：乙醇对酿酒酵母具有毒性，降低细胞活力和发酵效率，需要获得乙醇耐受性突变菌株并理解其耐受机制，以提高生物乙醇生产效率。
关键发现：['筛选出3株乙醇耐受突变体YFY1、YFY2和YFY3，可在含13%乙醇的培养基中生长，而野生型W303-1A在10%乙醇下不能生长。', '在8%乙醇处理16小时后，YFY3存活率为58.2% ± 等 3 条
核心问题：将合成气发酵从实验室规模放大到100 L中试规模发酵罐，并验证发酵系统及工艺设计的可行性，以促进合成气乙醇发酵的商业化。
关键发现：在100 L发酵罐中运行59天，乙醇浓度达25.26 g L⁻¹，为血清瓶发酵的6倍 等 5 条
核心问题：提高大肠杆菌对萜类生物燃料前体香叶醇的耐受性，以支持萜类生物燃料的微生物生产。
关键发现：过表达 marA 使大肠杆菌在 1% (v/v) 香叶醇平板覆盖下的菌落形成效率较野生型对照提高 10^4 倍；在液体覆盖培养中，4 小时后 marA 过表达菌株仍保持 等 5 条
核心问题：酵母细胞壁蛋白容纳能力有限，导致异源酶在细胞表面展示量受限，需要提高细胞壁对异源蛋白的锚定容量以提升酶活。
关键发现：在72 h培养时，SED1敲除株BYsed1Δ-BG的细胞表面BGL1活性比对照株BY-BG-SS高22% 等 4 条
核心问题：研究添加萜类生物合成前体对银杏细胞培养中白果内酯（bilobalide）和银杏内酯（ginkgolides）积累的影响，并阐明其生物合成途径的调控机制。
关键发现：HMG-CoA处理使细胞中GA含量增加4.25倍，最大产量34.3 mg/g DW 等 11 条
核心问题：如何通过过表达ppt1基因提高裂殖酵母中泛醌-10（辅酶Q10）的产量，并考察其表型变化及实现大规模高细胞密度发酵。
关键发现：过表达MTppt1和ERppt1使裂殖酵母泛醌-10含量分别提高3.7倍和5.1倍 等 2 条
核心问题：大多数高等植物和微藻不能合成酮类胡萝卜素（如虾青素、角黄素），如何在真核微藻莱茵衣藻中通过代谢工程实现酮类胡萝卜素的合成。
关键发现：从雨生红球藻分离的bkt1 cDNA（GenBank X86782）在大肠杆菌中功能互补产生角黄素及痕量海胆酮 等 5 条
核心问题：在真核酵母毕赤酵母（Pichia pastoris）中，类胡萝卜素途径酶（CrtE、CrtB、CrtI）因膜结合特性而可能随机分布于细胞膜或细胞器膜上，其异源表达时缺乏正确的亚细胞定位；本研究探讨是否可通过过氧化物酶体靶向信号（PTS1）将这些酶定向导入过氧化物酶体，并验证其可行性。
关键发现：在YPD培养基中，无PTS1的酶-EGFP融合蛋白均匀分布于整个细胞，而带PTS1的融合蛋白则聚集于1~2个过氧化物酶体斑点 等 2 条
核心问题：如何在重组酿酒酵母中高效表达乙肝表面抗原S域（sHBsAg）蛋白，并提高其产量和正确组装能力。
关键发现：批量发酵中，单独表达sHBsAg的菌株（S. cerevisiae 2805/pBMFα-sHBsAg）获得4.92 g/L干重和2.21 mg/L sHBsAg 等 4 条
核心问题：呼吸缺陷型工程酿酒酵母在单独以木糖为碳源时无法维持发酵活性，但在葡萄糖与木糖混合底物下能否保持高效乙醇生产？
关键发现：葡萄糖重复批次发酵中，乙醇产率接近理论值0.46 g/g，体积乙醇生产率从7.5 g/L/h提升至8.3 g/L/h 等 3 条
核心问题：在毕赤酵母中，不同发酵工艺条件（甲醇限制、碳源切换、氧限制）下AOX1启动子调控和过氧化物酶体生物发生的差异，及其对重组蛋白生产的影响。
关键发现：['ML条件下Ub-R-GFP荧光强度从诱导起点0增至36h的630.7±73 RFU，随后84h降至459.0±45 RFU 等 3 条
核心问题：缺乏对重组工业酿酒酵母在高温下利用木糖生产乙醇的转录组理解，需要鉴定与高温乙醇生产相关的关键基因和调控机制。
关键发现：在38°C发酵中，最佳菌株sun049T产乙醇15.2 g/L，达到理论产量的63% 等 5 条