Eubacterial Diterpene Cyclase Genes Essential for Production of the Isoprenoid Antibiotic Terpentecin
核心问题:真细菌中是否存在二萜环化酶(DC)?本研究旨在鉴定产萜类抗生素terpentecin的链霉菌中负责二萜骨架形成的环化酶基因,并证明其功能。
关键发现:ORF11和ORF12基因中断突变株完全丧失terpentecin(TP)产生能力,互补后恢复 等 5 条
核心问题:真细菌中是否存在二萜环化酶(DC)?本研究旨在鉴定产萜类抗生素terpentecin的链霉菌中负责二萜骨架形成的环化酶基因,并证明其功能。
关键发现:ORF11和ORF12基因中断突变株完全丧失terpentecin(TP)产生能力,互补后恢复 等 5 条
核心问题:过氧化物酶体过氧化氢酶Cta1p的PTS1信号(-NKF)转运效率低下,导致其在甲醇生长细胞中呈胞质/过氧化物酶体双定位,论文旨在阐明这种低效转运的机制及其代谢意义。
关键发现:CTA1编码504个氨基酸,蛋白分子量57,092 Da。野生型菌株中过氧化氢酶活性在甲醇、油酸、D-丙氨酸和葡萄糖培养下分别为2,530、1,010、117和10.2 U/mg蛋白。cta1Δ菌株在甲醇中培养110 h后H2O2积累至0.67 mM。甲醇生长细胞中约40%的GFP-Cta1p...
核心问题:探究光合蓝藻 Synechocystis sp. PCC6803 在光合条件下类异戊二烯生物合成是否遵循大肠杆菌中定义的 MEP 途径,以及丙酮酸和脱氧木酮糖-5-磷酸等初始底物是否参与该过程。
关键发现:体外无细胞体系中,1 mM GA3P 或 500 μM DHAP 单独添加均可显著刺激 [14C]IPP 掺入,GA3P 与 DHAP 联合刺激效果更强 等 4 条
核心问题:克隆并表征同时具有甲羟戊酸和非甲羟戊酸途径的链霉菌CL190中的1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶(DXP合酶),以阐明其在非甲羟戊酸途径中的作用及酶学性质,并为理解该途径的限速步骤提供动力学参数。
关键发现:克隆的dxs基因编码631个氨基酸,预测分子量68 kDa 等 8 条
核心问题:解析工程菌E. coli KO11在木糖厌氧发酵中生长速率和糖酵解通量显著高于亲本菌株B的分子机制,探究引入同型乙醇途径对木糖分解代谢基因表达的影响。
关键发现:KO11最大比生长速率为0.224/h,约为亲本B的1.3倍 等 6 条
核心问题:研究大肠杆菌泛酸激酶(CoaA)的反馈抑制在控制辅酶A(CoA)水平中的关键作用,通过构建反馈抗性突变体验证其生理意义。
关键发现:CoaA[R106A]保留约54%的野生型催化活性(比活350 vs 650 nmol/min/μg),CoaA[H177Q]保留6%,CoaA[F247V]保留25% 等 2 条
核心问题:阐明大肠杆菌lytB基因的功能,并验证其是否参与异戊二烯(类异戊二烯)生物合成以及是否为必需基因。
关键发现:lytB基因对大肠杆菌生存是必需的,缺失导致细胞裂解 等 7 条
核心问题:肠球菌中甲羟戊酸途径的关键酶mvaE基因是否编码真正的双功能蛋白(乙酰乙酰辅酶A硫解酶和HMG-CoA还原酶),以及该双功能酶的酶学性质。
关键发现:mvaE基因产物为83.5 kDa(计算86,496 Da),在E. faecalis、E. faecium和E. hirae中以单一多肽形式存在。纯化蛋白纯度>95%,产量平均10 mg/L。乙酰乙酰辅酶A硫解酶活性:合成最适pH 等 4 条
核心问题:阐明大肠杆菌MEP途径中gcpE基因的功能,验证其参与异戊二烯生物合成的MEP途径
关键发现:gcpE基因敲除突变株(wt ΔgcpE)仅在外源补充100 μM mevalonate时才能生长,与dxr敲除突变株(wt Δdxr)行为一致 等 5 条
核心问题:从嗜热酸古菌Sulfolobus solfataricus基因组中鉴定一个功能未知的仿(all-E)型异戊烯基二磷酸合酶同源基因,确定其产物链长和生物学功能。
关键发现:编码281个氨基酸的蛋白,计算分子量32,274 Da(SDS-PAGE约32 kDa) 等 5 条
核心问题:阐明集胞藻PCC 6803中sll1556基因在类异戊二烯生物合成中的作用,特别是其是否参与戊糖磷酸循环底物向类异戊二烯前体的转化,以及是否存在非经典的MEP途径分支。
关键发现:敲除sll1556后,突变体(Δsll1556)在体外不能利用果糖-6-磷酸(FR6P)、甘油醛-3-磷酸(GA3P)和葡萄糖-6-磷酸(GL6P)刺激[14C]IPP掺入类异戊二烯,而野生型可被这些底物刺激;②加入重组Sll1556蛋白可恢复突变体上清中的合成能力,且FR6P的刺激作用相当于... 等 3 条
核心问题:解析Myxococcus xanthus光诱导carQRS启动子的最小功能区域和关键序列元件,阐明其光依赖性转录调控机制。
关键发现:最小光诱导启动子位于-145至+40之间(-165至+66片段具有完整活性) 等 8 条
核心问题:如何通过代谢工程提高Clostridium acetobutylicum丁醇/丙酮比例,同时避免因下调丙酮途径而导致的丁醇产量下降。
关键发现:与仅表达反义RNA的824(pCTFB1AS)相比,824(pAADB1)的丁醇产量提高约2.8倍并恢复到质粒对照水平 等 6 条
核心问题:阐明spo0A过表达对丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)的转录组影响,并揭示其在丁醇胁迫响应中的作用机制。
关键发现:824(pMSPOA)总溶剂产量250 mM(137 mM丁醇、90 mM丙酮、23 mM乙醇),对照824(pIMP1)为248 mM(150 mM丁醇、77 mM丙酮、21 mM乙醇) 等 2 条
核心问题:反应中心 H 亚基(puhA 编码)是否对光合细菌 Rhodospirillum rubrum 中 LH1 复合物的高水平形成及光合膜的形成是必需的?
关键发现:在 M 培养基中,S1 来源的 puhA 缺失突变体(SPUHK1、SPUHK2)LH1 吸收峰为野生型的 93% 和 71%;在 M2S 培养基中,S1 和 G9 突变体 LH1 水平分别降至野生型的 32-38% 和 26-32%;在 M2SF 培养基中,SPUHK1、SPUHK2、GPU... 等 3 条
核心问题:鉴定绿色硫细菌Chlorobium tepidum中类胡萝卜素生物合成相关基因,并阐明类胡萝卜素的生物合成途径及其生理功能。
关键发现:通过基因失活鉴定出6个类胡萝卜素合成基因:crtB(CT1386,八氢番茄红素合酶)、crtP(CT0807,八氢番茄红素脱饱和酶)、crtQ(CT1414,ζ-胡萝卜素脱饱和酶)、crtU(CT0323,γ-胡萝卜素脱饱和酶)、crtC(CT0301,类胡萝卜素1',2'-水合酶)、crtH... 等 6 条
核心问题:对谷氨酸棒杆菌基因组预测的20个氨基转移酶蛋白进行系统的功能鉴定,以明确其在氨基酸合成和代谢中的具体作用。
关键发现:IlvE以L-谷氨酸为氨基供体时,对2-氧代-3-甲基戊酸、2-氧代异己酸、2-氧代异戊酸和2-氧代丁酸的比活分别为9.6、13.9、13.7和4.3 μmol min−1 mg−1 等 8 条
核心问题:鉴定蓝藻Synechocystis sp. PCC 6803中由slr1293编码的蛋白功能,验证其是否为myxoxanthophyll生物合成所需的C-3',4'脱饱和酶(CrtD)。
关键发现:在高光强下,myxoxanthophyll占Synechocystis sp. PCC 6803总类胡萝卜素的四分之一以上。 等 6 条
核心问题:天蓝色链霉菌A3(2)中光诱导类胡萝卜素生物合成的调控机制不明,尤其是负责光依赖性转录的sigma因子未被鉴定。
关键发现:S. coelicolor A3(2)在蓝光(400-460 nm)诱导下产生类胡萝卜素(包括isorenieratene和β-胡萝卜素),光强约2.4 μmol s^-1 m^-2 等 8 条
核心问题:开发Rhodospirillum centenum的遗传操作系统,分离并鉴定参与光合作用(包括细菌叶绿素a合成、类胡萝卜素合成、反应中心组装、电子传递和氧调控)的突变体,从而开展该物种光合作用的遗传分析。
关键发现:共分离到38个细菌叶绿素a(Bchl a)合成突变体,覆盖从原卟啉IX到Bchl a八步反应中的七步:其中9个突变体(FY023等)阻断镁螯合酶/甲基转移酶步骤并积累原卟啉IX 等 6 条