核心问题：如何通过扫描嵌合方法改变细菌脂肪酸单加氧酶 CYP102A1 的底物选择性，使其像昆虫萜烯ω-羟化酶 CYP4C7 一样将法尼醇氧化为 12-羟基法尼醇。
关键发现：最佳嵌合酶 C(78-82,F87L,328-330) 对法尼醇的转换数为 567 ± 45 nmol min⁻¹ nmol⁻¹，约为野生型 CYP102A1（285 ± 22）的 2 倍，比 CYP4C7（4.1 ± 等 8 条
核心问题：实现超嗜热古菌 Thermococcus strain ES1 含铁乙醇脱氢酶（ADH）的克隆、异源表达与全面表征，以解决此类热稳定酶难以获得活性重组形式的问题，并为生物技术应用提供基础。
关键发现：成功在大肠杆菌中异源表达了来自超嗜热古菌 Thermococcus strain ES1 的含铁乙醇脱氢酶（ADH）。重组酶比活为 105±2 U/mg，与天然酶（110±3 U/mg）几乎一致；两者均为同源四聚体，亚基分子量约45±1 kDa；重组酶含铁 等 3 条
核心问题：提高超嗜热古菌 Pyrococcus furiosus 醇脱氢酶 AdhA 在低温（30°C）下对 2,5-己二酮的活性，同时保持其热稳定性，以实现 (2S,5S)-己二醇的工业化生产。
关键发现：野生型 AdhA 在 30°C 的活性不超过最适活性（90°C）的 5%；经一轮易错 PCR 构建约 1,500 个突变株，筛选得到最佳突变体 13F2，其在 30°C 对 2,5-己二酮的最大比活为 等 8 条
核心问题：如何高效、选择性地将主要人参皂苷Rb2转化为具有更强药理活性的稀有皂苷化合物Y和化合物K，同时克服已知酶选择性低和酶分子未知的问题。
关键发现：bgp3基因长2271 bp，编码756个氨基酸，属于糖基水解酶家族3。重组Bgp3（0.1 mg/ml酶，20 mM磷酸钠缓冲液pH 7.0，40°C）反应12 h，可使0.74 mg/ml的Rb2转化为0.27 mg/ml化合物Y和0.1 mg/ml化合物K。产物经ESI-MS确认：化合物...
核心问题：探究(+)-germacrene A synthase中保守三连体TSA的苏氨酸羟基对环化酶催化活性的作用，验证碳正离子稳定机制。
关键发现：野生型IdGAS的kcat为1.6×10^-2 s^-1，Km为11 μM 等 7 条
核心问题：克隆并表征肺炎克雷伯氏菌XJ-Li的meso-2,3-丁二醇脱氢酶，揭示其酶学特性，为其在2,3-丁二醇生物合成及手性化合物合成中的应用提供基础。
关键发现：重组meso-2,3-丁二醇脱氢酶经纯化复性后，还原乙偶姻活性为218 U/mg，氧化meso-2,3-丁二醇活性为66 U/mg 等 4 条
核心问题：化学合成维甲类化合物存在纯化步骤复杂、产生化学废弃物和副产物等缺点，需要开发生物技术方法生产全反式视黄醇。本文旨在表征来自Kangiella koreensis的酒精脱氢酶（ADH）并用于全反式视黄醇的生物法生产。
关键发现：重组K. koreensis ADH以40 kDa二聚体形式存在，对全反式视黄醛的比活为21.3 nmol min⁻¹ mg⁻¹，Km为1.8 μM，kcat为1.7 min⁻¹，kcat/Km为0.95 μM⁻¹ min⁻¹。最适pH 6.5，最适温度60 °C。在优化条件下（2,200 m...
核心问题：从微生物中分离纯化能够不对称切割β-胡萝卜素C9–C10双键并生成β-apo-10'-类胡萝卜素的酶，此前尚无微生物来源的BCO2酶被报道。
关键发现：ScBCO2经纯化后纯化倍数为9.5倍，回收率10.8%，比活力0.38 U/mg 等 4 条
核心问题：将人参皂苷Gypenoside XVII高效生物转化为高活性稀有人参皂苷Compound K，需要特异性水解糖基的酶。
关键发现：bgy1基因长2283 bp，编码761个氨基酸；重组Bgy1最适pH 等 3 条
核心问题：从Meyerozyma guilliermondii中发现并表征一种新型烯还原酶（MgER），解决现有烯还原酶活性低、底物耐受性差、立体选择性不足等问题，实现α,β-不饱和化合物的高效不对称还原。
关键发现：MgER与OYE2.6氨基酸一致性57% 等 8 条
核心问题：表征重组广藿香醇合酶变体（PTS var.1）的酶学特性，包括产物谱、最适反应条件、动力学参数和底物范围，以评估其作为体外生物催化剂生产萜烯的潜力。
关键发现：PTS var.1的最适pH为7.25，最适温度为38°C；在pH 等 3 条
核心问题：缺乏能够高效对映选择性水解 dl-薄荷醇苯甲酸酯生成 l-薄荷醇的新型酯酶，需要从自然界发掘并表征新的酶催化剂。
关键发现：克隆到的 abmbh 基因长 1080 bp，编码 360 个氨基酸，理论分子量 等 11 条
核心问题：提高微生物转谷氨酰胺酶（MTG）的活性和稳定性，通过删除特定序列获得高稳定性突变体
关键发现：纯化的突变MTG和野生MTG活性分别为0.22 U/mg和0.16 U/mg 等 2 条
核心问题：阐明 Pseudomonas putida 细胞色素 P-450cam 的 Arg-112 残基及其正电荷在与 putidaredoxin 的电子传递过程中的作用。
关键发现：野生型对 d-camphor 的 Kd 为 等 10 条
核心问题：通过定向突变解析(-)-蒎烯合酶与(-)-莰烯合酶产物特异性的分子基础，确定导致催化差异的关键氨基酸残基。
关键发现：野生型PS产生29.5% α-蒎烯、63.4% β-蒎烯及少量myrcene(1.8%)和limonene(3.6%) 等 7 条
核心问题：通过定点突变解析trichodiene synthase中NSE/DTE金属离子结合基序和酪氨酸295残基在环化反应中的催化功能，并探讨真菌型NSE基序与植物型DTE基序的差异。
关键发现：N225D突变使kcat降低28倍（0.005 s-1 vs 野生型0.138 s-1），KM增加6倍（0.485 μM vs 等 3 条
核心问题：测试简单互换假说：是否可通过交换MST家族异分支酸合酶与邻氨基苯甲酸合酶（水杨酸合酶）的非保守活性位点残基来互换lyase活性，即给PchA增加lyase活性或从Irp9去除lyase活性。
关键发现：WT Irp9的水杨酸合酶活性kcat/Km为42,000 M^-1 s^-1，异分支酸-丙酮酸裂解酶活性为159,000 M^-1 s^-1 等 4 条
核心问题：提高Pseudomonas alcaligenes脂肪酶在薄荷醇丙酸酯手性拆分中的非对映选择性
关键发现：野生型PAL催化消旋薄荷醇丙酸酯水解时，L-薄荷醇的de_p为35% 等 5 条
核心问题：现有酶法合成1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸(DXP)的产率低、纯化耗时长，难以满足对DXR抑制剂筛选及同位素标记DXP的需求。
关键发现：优化条件下DXP浓度可达450 mM；以100 mg Li2-DHAP(0.55 mmol)和121.5 mg丙酮酸钠(1.1 mmol)为底物，经0.2 mg TIM和0.8 mg DXS在37°C反应过夜，获得96 mg DXP，产率81.5%，纯度>95%；最优反应条件为pH 等 4 条
核心问题：系统定量解析strictosidine synthase的底物识别机制，探索其能否利用非天然底物生成新的生物碱类似物。
关键发现：天然底物色胺的Km=7.4 μM，kcat=0.9 min-1，kcat/Km=2030 M-1 s-1 等 12 条