核心问题：缺乏在解脂耶氏酵母中同时分析胞内核苷酸和辅酶的方法，限制了对产脂和产番茄红素代谢机制的理解。
关键发现：优化后的CZE方法可在32 min内分离12种代谢物（4种辅酶、5种核苷酸、3种核苷），使用70 mM碳酸盐缓冲液（含1% β-CD，pH 10），电压15 kV 等 5 条
核心问题：酵母代谢工程如何超越传统的乙醇和酿酒酵母，成为多种高价值化学品的生产平台，并解决产量低于细菌宿主的问题。
关键发现：酵母已成功生产多种高价值化学品，具体包括：酿酒酵母产丁醇2.5 mg/L 等 20 条
核心问题：微生物系统中萜类化合物的高效过量生产以及新萜类化合物的高效挖掘。
关键发现：['通过多元模块法平衡上游MEP途径和下游萜类形成途径，紫杉二烯产量提高约15000倍（Ajikumar et al., 2010）。', '在酿酒酵母中，在细胞质和线粒体双重过表达MVA途径基因，异戊二烯产量达到2.5 g/L（Lv et al., 2016）。', '通过体外重建MVA途径... 等 3 条
核心问题：如何利用解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）作为底盘细胞，通过代谢工程高效生产源自乙酰CoA、脂肪酸和脂质的工业化学品（如生物柴油、功能性脂肪酸和类胡萝卜素），并实现商业化应用。
关键发现：过表达PYC和ACL1使脂质含量达45% DCW，较亲本提高约50% 等 13 条
核心问题：产油酵母的独特代谢机制和遗传工具开发相对滞后，限制了其作为可持续生物制造底盘的高效利用
关键发现：产油酵母脂质可积累至细胞干重的85% 等 10 条
核心问题：解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）以甘油为底物生产赤藓糖醇的生产率受限于甘油同化、戊糖磷酸途径碳流分配以及产物分解代谢等问题，常规培养基优化方法提升有限。
关键发现：摇瓶培养中，共表达GUT1和TKL1的FCY214菌株赤藓糖醇比生产速率较野生型提高65%（0.058 vs 等 3 条
核心问题：紫杉醇生物合成中第一个氧化酶taxadiene-5α-hydroxylase（CYP725A4）选择性差，在异源体系中产生大量非预期副产物，导致目标产物 taxa-4(20),11(12)-dien-5α-ol（TSOH）选择性仅5%~15%，成为紫杉醇异源生产的关键瓶颈。
关键发现：在多种重构系统中，TSOH选择性仅5%~15%，其余85%~95%为非预期副产物 等 7 条
核心问题：解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）同源重组效率低，缺乏无标记多基因整合工具，传统方法依赖选择标记和标记回收，难以快速稳定地构建产脂/萜类菌株。
关键发现：筛选17个位点，5个位点高效整合：MFE1效率69±25%，AXP 62±10%，XPR2 48±13%，A08 53±33%，D17 52±13%；POX4/E07/XDH效率<6%；KU70缺失使LEU2、XLK、XYR整合率从0提高到7-28%；MFE1位点表达比其他位点低约2.3倍；整... 等 4 条
核心问题：饲料工业中脂质消化利用率低以及蛋白质资源短缺两大问题
关键发现：最佳工程菌株YLY5在10升发酵罐中以甘蔗糖蜜培养基(YPM)同时产脂肪酶16420 U/ml（4.13 g/L）和单细胞蛋白151.2 g/L；在摇瓶水平，YLY5在YPD中脂肪酶活性2175 U/ml，YPS中2615 U/ml，YPM中3075 U/ml、SCP 39 g/L，废食用油培... 等 3 条
核心问题：解决光合自养蓝细菌与异养工程菌共培养时存在的相互抑制问题（如活性氧胁迫、光照遮蔽、生长条件不兼容）以及产物分离困难，实现利用CO2和光能生产高值色素。
关键发现：在含蔗糖酶的水凝胶共培养体系中，indigoidine产量达7.5±0.7 g/L水凝胶体积，β-胡萝卜素产量达1.3±0.3 g/L水凝胶体积，分别比无封装的游离共培养高15倍和22倍 等 3 条
核心问题：分析 Yarrowia lipolytica 中高度同源的赤藓糖还原酶（ER）同源基因在渗透胁迫下对赤藓醇、甘露醇和阿拉伯醇合成的影响，确定关键基因及基因家族的功能冗余，并探索通过基因敲除将碳流从赤藓醇转向其他多元醇的可能性。
关键发现：敲除8个ER同源基因（D8菌株）使赤藓醇合成降低91%，甘露醇合成增加53%，阿拉伯醇合成增加近8倍（相比对照菌株）。D8菌株96 h时赤藓醇、甘露醇和阿拉伯醇产量分别为3.34 g/L、6.72 g/L和9.28 g/L，而对照菌株阿拉伯醇产量为1.17 g/L 等 4 条
核心问题：在解脂耶氏酵母中高效合成大麻素前体橄榄醇酸（OLA），解决己酰辅酶A、丙二酰辅酶A、乙酰辅酶A、NADPH和ATP等前体供应不足的瓶颈问题。
关键发现：初始菌株YL101仅产OLA 0.11 mg/L 等 6 条
核心问题：天然倍半萜产量低且提取困难，需通过微生物发酵和代谢工程策略实现倍半萜的高效生物合成。
关键发现：在E. coli中，通过异源MVA途径和发酵优化，amorphadiene最高产量达29.7 g/L 等 6 条
核心问题：确定利用甘油生产柠檬酸的 Yarrowia lipolytica 菌株所需的最佳搅拌和通气条件。
关键发现：最佳搅拌速率为 800–900 rpm，通气速率为 等 7 条
核心问题：阐明删除储藏脂质合成基因（DGA1、DGA2、LRO1和ARE1）对解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）细胞生理和调控的影响
关键发现：['氮限制下，Q4菌株的细胞干重（CDW）和脂质含量分别比野生型降低33%和32%，脂质产量降低37% 等 5 条
核心问题：在解脂耶氏酵母中，鉴定主要负责长链ω-羟基脂肪酸氧化为二羧酸的酶（脂肪醇脱氢酶还是脂肪醇氧化酶），以指导ω-羟基脂肪酸的生物技术生产。
关键发现：在Y. lipolytica H222ΔP（仅敲除POX1-6）中，发酵罐培养4天后产生约6 g/L十二碳二酸（DDDA），几乎不积累ω-羟基十二酸（ω-HDDA）。敲除8个醇脱氢酶基因（FADH, ADH1-7）仅轻微增加ω-羟基脂肪酸积累。敲除FAO1的菌株H222ΔPΔF产生约7 g/L...
核心问题：解脂耶氏酵母缺乏高效、标准化的多基因组装平台，传统克隆方法费时费力，难以实现复杂代谢通路的快速组合克隆。
关键发现：构建了含13个Golden Gate片段的复杂组装体，转化Y. lipolytica后每个反应可获得超过4×10^2个菌落 等 4 条
核心问题：在非类胡萝卜素产生菌解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）中实现番茄红素的高效异源生产，并解决产物储存和产量限制问题。
关键发现：单独表达crtB和crtI的菌株（H222 ΔBI）在YPD摇瓶中96 h产番茄红素142 μg/g DCW 等 4 条
核心问题：LIP2和POX2启动子驱动重组蛋白生产时需疏水性诱导物（如油酸），成本高且难控制，需阐明碳源对启动子调控的影响以优化诱导策略。
关键发现：pLIP2在含葡萄糖的复合培养基中完全不被诱导，而pPOX2有微弱诱导 等 5 条
核心问题：类胡萝卜素微生物生产中产量受限、产物毒性、膜储存空间不足以及稀有类胡萝卜素和衍生物合成途径缺乏等问题。
关键发现：Blakeslea trispora经氧传递速率控制(OTR 20.5 mM/L/h)产生β-胡萝卜素704.1 mg/L，添加番茄红素环化酶抑制剂产生番茄红素256 mg/L 等 9 条