共 844 篇
核心问题：如何在大肠杆菌中功能性表达未结合配体的血清视黄醇结合蛋白，并研究其配体结合与折叠稳定性
关键发现：重组RBP产量约0.15 mg/L培养物（A550=1.3）
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蛋白质工程
E. coli secretionRBPlipocalin familyprotein foldingretinoic acid
Escherichia coli JM83
Escherichia coli JM83
Escherichia coli JM83
核心问题：在烟草中通过叶绿体定位的胆碱单加氧酶(CMO)合成甘氨酸甜菜碱时，通量受什么因素限制？叶绿体对胆碱的跨膜转运是否是关键瓶颈？
关键发现：优化后的CMO表达构建体使CMO活性最高达8 pkat mg⁻¹蛋白，比原有nCMO构建体高100倍以上，比盐胁迫菠菜高10倍，但叶片甘氨酸甜菜碱水平与低活性对照无显著差异（约43-69 nmol g⁻¹ Fw）
等 4 条
代谢工程
Nicotiana tabacumcholinecholine monooxygenasecholine oxidaseglycine betainepathway modeling
烟草（Nicotiana tabacum ...
烟草（Nicotiana tabacum ...
烟草（Nicotiana tabacum ...
核心问题：确定酿酒酵母葡萄糖发酵过程中限制甘油产量的关键步骤（甘油合成或转运）。
关键发现：过表达GPD1或GPD2的菌株甘油产量分别达24.8和24.3 g/L，为对照的3.3倍，乙醇减少10-12 g/L，乙醛积累增加，终生物量降低2倍，发酵时间延长60%
等 4 条
代谢工程
FPS1MIP proteinSaccharomyces cerevisiaefermentationglycerol 3-phosphataseglycerol production
Saccharomyces cerevis...
Saccharomyces cerevis...
Saccharomyces cerevis...
核心问题：大肠杆菌无法正确折叠富含半胱氨酸的ghilanten，需要选择合适的真核表达系统高效分泌表达具有抗凝活性的重组ghilanten。
关键发现：在2升摇瓶BMMC培养基中，重组ghilanten分泌量约10 mg/L
等 4 条
发酵工程
Pichia pastorisanticoagulantantimetastaticfactor Xa inhibitorgene synthesisghilanten
Pichia pastoris SMD1168
Pichia pastoris SMD1168
Pichia pastoris SMD1168
核心问题：在甲基营养酵母Pichia pastoris中实现牛视紫红质（opsin）的功能性表达，为大量生产结构生物学和生物物理研究所需的视紫红质蛋白提供高效表达系统。
关键发现：表达水平为约0.3 mg opsin/L（A600=1.0），实际测定约0.27±0.03 mg/L，约占膜总蛋白的0.6-0.75%
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发酵工程
11-cis-retinalG protein activationPichia pastorisbovine opsinheterologous expressionrhodopsin
Pichia pastoris GS115
Pichia pastoris GS115
Pichia pastoris GS115
核心问题：人μ-阿片受体在毕赤酵母中表达水平低，功能性受体产量不足，难以满足结构生物学研究所需的大量纯化蛋白。
关键发现：在30°C、pH7.5、0.5%甲醇诱导15h条件下，功能表达量为1 pmol/mg膜蛋白，总表达量为20 pmol/mg
等 5 条
蛋白质表达与纯化
EGFPGPCRPichia pastorisexpressionfusion proteinμ-opioid receptor
Pichia pastoris SMD1163
Pichia pastoris SMD1163
Pichia pastoris SMD1163
核心问题：解决Zymomonas mobilis在燃料乙醇和高值产品生产中的底物谱窄、工业应用不足等问题，并探索其代谢工程潜力。
关键发现：['ZM4(pZB5)在65 g/L葡萄糖+65 g/L木糖培养基中48 h产乙醇>60 g/L，乙醇产率0.46 g/g。', '连续培养中，最大乙醇生产率可达5 g/L/h（细胞循环系统，D=0.1 h^-1，产率0.50 g/g）。', '木糖利用菌株在含50/50 g/L糖时，最大比生...
代谢工程、发酵工程
Ethanol productionGlycose/Xylose fermentationsHigher value productsLignocellulosicsMetabolic engineeringZymomonas mobilis
Zymomonas mobilis ZM4...
Zymomonas mobilis ZM4...
Zymomonas mobilis ZM4...
核心问题：高价值p-薄荷烷型单萜（薄荷醇、香芹酮、柠檬烯等）的商业生产依赖天然提取和化学合成，面临产量波动、成本高和环境问题，亟需基于分子机制和代谢工程的生物技术生产平台。
关键发现：l-薄荷醇年产量超过30,000吨，其中约19,000吨来自天然薄荷油结晶，合成约6,300吨
等 10 条
代谢工程
CarvoneCineoleEssential oilLimoneneMentholMetabolic engineering
Mentha x piperita (pe...
Mentha spicata (spear...
Mentha x piperita (pe...
核心问题：如何有效地在高等植物和藻类中重构异戊二烯生物合成途径，以获得高产量目标代谢物，同时克服内源调控机制的制约。
关键发现：金色大米中β-胡萝卜素最高达1.6 μg/g胚乳
等 9 条
代谢工程
AlgaeBiotechnologyCarbon neutralGenetic engineeringGenetically modified organismsIsoprenoids
烟草 (Nicotiana tabacum)
烟草 (Nicotiana tabacum)
烟草 (Nicotiana tabacum)
核心问题：高等真菌产生的生物活性次级代谢物（如灵芝酸、虫草素等）产量低且化学合成困难，难以满足临床和市场需求，需要构建高效的高等真菌细胞工厂。
关键发现：PEG介导转化在平菇中每μg DNA每10^7原生质体可获得80-180个转化子
等 9 条
代谢工程
代谢工程发酵技术次级代谢产物生产组学分析细胞工厂药用蘑菇
Ganoderma lucidum
Ganoderma lucidum
Ganoderma lucidum
核心问题：异戊二烯类化合物（萜类）的微生物合成与转化过程中，产物的疏水性、挥发性和细胞毒性导致产物抑制、产品损失及产量低下，且缺乏工业规模的有效生物过程。需要开发适当的原位产物移除（ISPR）技术以解决这些问题。
关键发现：柠檬烯在水中的饱和溶解度为0.15 mM，carveol为19 mM
等 5 条
发酵工程
BioprocessIn situ product removalIsoprenoidsSolvent toleranceTerpenoids
Escherichia coli
Saccharomyces cerevisiae
Escherichia coli
核心问题：如何利用遗传修饰技术改良微生物菌株，提高氨基酸、有机酸、醇类、抗生素、重组蛋白等工业产物的产量和性能。
关键发现：文中报道了多种工程菌株的产量数据：L-谷氨酸可达150 g/L，L-赖氨酸盐酸盐可达170 g/L
等 27 条
代谢工程
代谢工程初级代谢产物基因工程抗生素有机酸次级代谢产物
Corynebacterium gluta...
Corynebacterium gluta...
Corynebacterium gluta...
核心问题：解决 M. circinelloides 中类胡萝卜素生成研究的分子工具不足问题，提供了一套完整的遗传操作工具，包括转化、基因替换、过表达、RNAi 沉默和功能基因组筛选。
关键发现：电穿孔转化使用 1–3 μg 环状质粒或 3–6 μg 线性 DNA 可高效转化 Mucor 原生质体
等 9 条
代谢工程
Functional genomicsGene overexpressionGene replacementGene silencingRNAiTransformation
Mucor circinelloides
Mucor circinelloides
Mucor circinelloides
核心问题：线粒体ADP/ATP载体（Ancp）是研究线粒体载体家族的重要模型，但其高分辨率三维结构显示为单体，与生化研究推测的二聚体功能组织矛盾。为了解析其真实结构，需要获得高纯度、高产量且能稳定二聚体构象的蛋白样品。天然来源（牛心）虽丰度高、易纯化，但无法进行遗传操作；酵母重组来源可进行基因工程改造，...
关键发现：牛心线粒体中Ancp占线粒体蛋白的比例高达10%
等 2 条
结构生物学与蛋白质纯化
High yield purificationMitochondrial ADP/ATP carrierMitochondrial carrier
牛心脏（Bos taurus）
酿酒酵母（Saccharomyces ce...
酿酒酵母菌株JL-AAH6
核心问题：如何利用蓝细菌作为光合自养底盘，直接从CO2高效合成C3平台化学品（如乳酸、甘油等）和高价值萜类化合物，以替代依赖石化资源的传统生产方式。
关键发现：文献报道的代表性产量：工程化S. elongatus PCC7942表达D-乳酸脱氢酶和转运蛋白，D-乳酸产量55 mg/L（13.8 mg/L/day）
等 5 条
代谢工程
C3 platform chemicalsCyanobacteriaPhotosynthetic productionTerpenoids
Synechococcus elongat...
Synechococcus elongat...
Synechococcus elongat...
核心问题：在酿酒酵母中高效表达和分泌黑曲霉RH5344内切多聚半乳糖醛酸酶，提高重组酶的产量和稳定性。
关键发现：缩短ADHI启动子使PG产量从1200 U/ml提高到3000 U/ml（2.5倍）
等 5 条
发酵工程
Aspergillus nigerSaccharomyces cerevisiaegene expressionpolygalacturonasesecretion
Saccharomyces cerevis...
Saccharomyces cerevis...
Saccharomyces cerevis...
核心问题：半纤维素水解产物含有己糖和戊糖混合物，重组大肠杆菌KO11优先发酵己糖，导致木糖发酵缓慢或不完全，需要改进菌株以高效发酵混合糖中的戊糖。
关键发现：SL28和SL40在120 g/L木糖中60 h内产生60 g/L乙醇，比KO11高20%
等 4 条
代谢工程
ethanol productionfosfomycin-resistant mutantspentose fermentationrecombinant Escherichia colisugar mixturesxylose
Escherichia coli KO11...
Escherichia coli SL31
Escherichia coli SL142
核心问题：研究聚乙二醇（PEG）诱导的枯草芽孢杆菌原生质体是否能被细菌染色体DNA转化，并探索其转化特性及机制。
关键发现：最大转化频率约为5×10^-5（每再生菌落中转化子比例）
等 6 条
微生物遗传学
枯草芽孢杆菌原生质体染色体DNA聚乙二醇诱导转化质粒DNA
Bacillus subtilis (菌株...
核心问题：能否在酿酒酵母中异源表达古菌膜蛋白细菌视蛋白（bacterio-opsin），并研究其膜定位、N端加工及功能性色素形成能力。
关键发现：['bop基因（前体形式和成熟形式）均能在酿酒酵母中转录和翻译，转录本约1100 nt。', 'BO蛋白在膜部分富集，定位于蔗糖梯度39-41%处，与质膜标记H+-ATPase共分离，细胞质中无BO。', '前体形式BO在AH22菌株中被加工为与天然成熟BO大小相同的蛋白，加工效率在最小培养基...
等 2 条
合成生物学
Bacterio-opsinExpressionMembranesYeast Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae
Schizosaccharomyces p...
Halobacterium salinarum
核心问题：研究氨基酸营养缺陷型酵母突变株中苏氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和亮氨酸的摄取及其向高级醇转化的相互影响
关键发现：异亮氨酸和亮氨酸最多90%被转化为2-和3-甲基丁醇，缬氨酸最多24%转化为异丁醇，苏氨酸最多20%转化为正丙醇
等 5 条
代谢工程
Amino AcidsHigher AlcoholsIsoleucineLeucineSaccharomyces cerevisiaeThreonine
Saccharomyces cerevis...
Saccharomyces cerevis...