Nootkatone
· 2014
· 10.1007/10_2014_279
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核心问题：如何高效、绿色地生物合成天然圆柚酮（(+)-nootkatone），以满足食品香料和杀虫剂等商业需求，克服化学合成与环境问题及天然提取产量低的瓶颈。
关键发现：圆柚酮气味阈值约为1 μg/L水 等 11 条
Cytochromes P450 for Terpene Functionalisation and Metabolic Engineering
· 2014
· 10.1007/10_2014_301
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核心问题：萜类化合物具有重要的工业与药学价值，但其天然来源提取困难、化学合成不经济。利用异源宿主进行萜类生物技术生产的关键在于鉴定并利用负责萜烯骨架氧化功能化的细胞色素P450酶。本文系统综述了P450在萜类功能化和代谢工程中的研究进展。
关键发现：['大肠杆菌中通过表达青蒿法呢烯合酶和异源甲羟戊酸途径，amorpha-4,11-diene产量高达27.4 g/L。', '青蒿CYP71AV1在大肠杆菌中经N端改造和共表达POR后，氧化产物总量达553 mg/L，但青蒿酸仅占一部分。', '通过工程化底物混杂的P450BM3（CYP102... 等 2 条
Genetic Modification of Plant Secondary Metabolite Pathways Using Transcriptional Regulators
· 2001
· 10.1007/3-540-45302-4_4
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核心问题：如何利用转录调控因子对植物次生代谢途径进行遗传改造，特别是苯丙烷/类黄酮和萜类吲哚生物碱（TIA）两条典型途径。
关键发现：通过T-DNA激活标签在长春花中筛选了400,000–500,000个独立转化细胞，从诱导的180个4-甲基色氨酸抗性愈伤组织中鉴定出20个Tdc mRNA升高的细胞系，其中6个同时有Str mRNA增高，并从line 46中克隆到ORCA3。（2）ORCA3过表达上调Tdc、Str、Sgd、... 等 3 条
Isoprene
Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology · 2014
· 10.1007/10_2014_303
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核心问题：异戊二烯是重要的工业化学品，主要来源于石油，需要开发可持续的生物合成方法；同时异戊二烯在植物抗逆中起作用，可工程化植物提高抗逆性。
关键发现：E. coli中通过MVA途径工程最高产量达123.6 g/L，产率2.21 g/L/h，葡萄糖得率16.3-17.4% 等 6 条
Terpene Hydroxylation with Microbial Cytochrome P450 Monooxygenases
· 2014
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核心问题：微生物细胞色素P450单加氧酶在萜类化合物羟基化中的应用潜力有限，如何通过蛋白质工程提高其选择性、活性及异源表达效率，以替代传统化学氧化方法。
关键发现：野生型CYP102A1对β-紫罗兰酮的活性低于1/min，经两轮易错PCR获得的三突变体A74E/F87V/P386S活性提高300倍 等 6 条
Advancement of Biotechnology by Genetic Modifications
· 10.1007/978-1-4939-8742-9_1
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核心问题：如何利用遗传修饰技术改良微生物菌株，提高氨基酸、有机酸、醇类、抗生素、重组蛋白等工业产物的产量和性能。
关键发现：文中报道了多种工程菌株的产量数据：L-谷氨酸可达150 g/L，L-赖氨酸盐酸盐可达170 g/L 等 27 条
Production of Aromatic Plant Terpenoids in Recombinant Baker's Yeast
Methods in Molecular Biology · 2017
· 10.1007/978-1-4939-3393-8_8
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核心问题：在重组酿酒酵母中高效生产植物萜类化合物（如trans-nootkatol），解决疏水底物/产物的相转移问题、挥发性产物损失以及产物对细胞的毒性问题。
关键发现：使用2.5倍标准浓度的半乳糖诱导时，萜类生产率仅为优化方案的50%，即降低半乳糖浓度可使生产率提高2倍 等 5 条
Construction of Carotenoid Biosynthetic Pathways Through Chromosomal Integration in Methane-Utilizing Bacterium \*Methylomonas\* sp. Strain 16a
· 10.1007/978-1-61779-879-5_10
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核心问题：在专性甲烷氧化细菌Methylomonas sp. strain 16a中，由于遗传工具不完善且难以引入复杂代谢途径，需要构建遗传稳定、适合工业发酵的类胡萝卜素（角黄素和虾青素）生产菌株。
关键发现：单拷贝crtZ基因的菌株Ax6-5中，虾青素占总类胡萝卜素的64% 等 3 条
Engineering Cyanobacteria for Photosynthetic Production of C3 Platform Chemicals and Terpenoids from CO2
· 2018
· 10.1007/978-981-13-0854-3_10
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核心问题：如何利用蓝细菌作为光合自养底盘，直接从CO2高效合成C3平台化学品（如乳酸、甘油等）和高价值萜类化合物，以替代依赖石化资源的传统生产方式。
关键发现：文献报道的代表性产量：工程化S. elongatus PCC7942表达D-乳酸脱氢酶和转运蛋白，D-乳酸产量55 mg/L（13.8 mg/L/day） 等 5 条
Genetic evidence for superoperonal organization of genes for photosynthetic pigments and pigment-binding proteins in Rhodobacter capsulatus
Molecular and General Genetics · 1989
· 10.1007/BF00330558
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核心问题：阐明荚膜红细菌（Rhodobacter capsulatus）光合基因簇中相邻的crtEF、bchCA和puf三个操纵子的转录组织及其相互调控关系，特别是bchCA操纵子的结构、转录方向以及上下游操纵子对它的影响。
关键发现：通过互补分析和极性插入突变，确定bchC和bchA组成一个操纵子，转录方向为bchC→bchA，bchA基因长度约4 kb，其3'末端位于EcoRI-Q片段，与pufQ起始密码子仅间隔1 bp。puf操纵子的两个启动子（Ppuf1和Ppuf2）均位于bchA结构基因内部 等 4 条
Transcriptional Control of the Saccharomyces cerevisiae ADH1 Gene by Autonomously Replicating Sequence Binding Factor 1
· 1995
· 10.1007/BF00293548
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核心问题：解析ABF1通过启动子和编码区内的结合位点调控酵母ADH1基因表达的机制及碳源依赖性
关键发现：删除启动子ABF1结合位点区(-717~-410)导致β-半乳糖苷酶活性降低4.7倍 等 8 条
Biosynthesis regulation of the \(\beta\) -glucosidase produced by a yeast strain transformed by genetic engineering
Applied Microbiology and Biotechnology · 1987
· 10.1007/BF00402336
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核心问题：解决木质纤维素生产乙醇中纤维二糖积累抑制纤维素酶的问题，需要获得高产β-葡萄糖苷酶且能发酵纤维二糖的酵母菌株，但重组酵母虽表达高酶活却无法厌氧发酵纤维二糖，需阐明其原因。
关键发现：在重组酵母TYKF2中，以纤维二糖5 g/L和50 g/L培养时β-葡萄糖苷酶活分别为5.8和6.9 I.U.，而供体菌K. fragilis Y610仅为0.025和0.051 I.U. 等 4 条
Influence of light on growth and pigmentation of the yeast Phaffia rhodozyma
· 1989
· 10.1007/BF00400151
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核心问题：光对Phaffia rhodozyma生长和虾青素等类胡萝卜素合成的影响，以及抗霉素抑制主呼吸链时，光如何通过替代氧化酶系统恢复生长并促进类胡萝卜素合成。
关键发现：高强度光抑制P. rhodozyma在琼脂平板上的生长并减少类胡萝卜素合成，β-zeacarotene增加，β-胡萝卜素和叶黄素（虾青素、phoenicoxanthin、HDCO）减少。液体培养中，抗霉素（0.2 μM）抑制野生型UCD-FST-67-385生长，光照可缓解抑制，并使类胡萝卜素... 等 3 条
An NADP-Linked Acetoacetyl CoA Reductase from Zoogloea ramigera
Archives of Microbiology · 1977
· 10.1007/BF00446864
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核心问题：阐明Zoogloea ramigera I-16-M中PHB合成途径中乙酰乙酰CoA还原酶的立体特异性和辅酶依赖性，以及NADPH在该途径中的调控作用
关键发现：发现两种立体特异性乙酰乙酰CoA还原酶：NADP+连接的D(-)-特异性酶和NAD+连接的L(+)-特异性酶。 等 5 条
Diminished Respiratory Growth and Enhanced Assimilative Sugar Uptake Result in Higher Specific Fermentation Rates by the Mutant Pichia stipitis FPL-061
Applied Biochemistry and Biotechnology · 1997
· 10.1007/BF02920417
· 含路线图 · 有原文
核心问题：毕赤酵母Pichia stipitis在发酵木糖和葡萄糖混合物时，由于呼吸消耗乙醇导致乙醇产量和得率较低，且低通气下糖摄取和发酵速率下降，需要获得发酵性能提高的突变株。
关键发现：在葡萄糖/木糖1:1混合糖发酵中，FPL-061产生29.4 g/L乙醇，得率0.42 g/g糖 等 3 条
Effect of oxidative stress on the biosynthesis of 2-C-methyl-D-erythritol-2,4-cycloprophosphate and isoprenoids by several bacterial strains
Archives of Microbiology · 1999
· 10.1007/s002030050680
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核心问题：探究氧化应激对细菌中2-C-甲基-D-赤藓醇-2,4-环焦磷酸（MEC）和类异戊二烯生物合成的影响，以及两者之间的关系
关键发现：研究发现Xanthomonas campestris所有受试菌株在苄基紫精（50 μg/ml）诱导的氧化应激下均积累MEC 等 3 条
Gibberellin biosynthesis in fungi: genes, enzymes, evolution, and impact on biotechnology
Applied Microbiology and Biotechnology · 2005
· 10.1007/s00253-004-1805-1
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核心问题：综述真菌赤霉素（GA）生物合成的基因、酶、进化及其对生物技术的意义，重点阐明Fusarium fujikuroi中GA生物合成基因簇的组成、功能、调控机制和进化起源。
关键发现：F. fujikuroi的GA生物合成基因簇约40 kb，包含7个酶编码基因，由GGDP经15步反应合成GA3。P450-1催化ent-kaurenoic acid至GA14的四步氧化，涉及C-6、C-7、C-3、C-18四个不同碳原子 等 7 条
Characterization of lycopene-overproducing E. coli strains in high cell density fermentations
Applied Microbiology and Biotechnology · 2006
· 10.1007/s00253-006-0357-y
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核心问题：表征两株通过系统性组合基因敲除构建的番茄红素过量生产的大肠杆菌菌株在高细胞密度发酵中的生产性能，并与亲本菌株对比，揭示其代谢特征和优化发酵条件。
关键发现：高氧水平和增加pH值对提高比产量和体积产量至关重要。两株工程菌的最比生产力分别为388.0 μg/g dcw h（ΔgdhA ΔaceE ΔfdhF）和496.3 μg/g dcw h（ΔgdhA ΔaceE ΔpyjD），均高于亲本菌株的242.9 μg/g dcw h。最大体积产量分别达到...
Functional expression system for cytochrome P450 genes using the reductase domain of self-sufficient P450RhF from Rhodococcus sp. NCIMB 9784
Applied Microbiology and Biotechnology · 2005
· 10.1007/s00253-005-0147-y
· 含路线图 · 有原文
核心问题：多种细菌I类细胞色素P450依赖外源还原伴侣蛋白，功能性表达困难，缺乏通用高效的表达系统以鉴定其催化功能。
关键发现：P450cam-Red融合蛋白在24 h内将0.5 mM (+)樟脑100%转化为5-exo-羟基樟脑，而对照菌株活性低 等 3 条
Cell adaptation to solvent, substrate and product: a successful strategy to overcome product inhibition in a bioconversion system
Applied Microbiology and Biotechnology · 2005
· 10.1007/s00253-005-1967-5
· 含路线图 · 有原文
核心问题：香芹酮（carvone）在生物转化过程中浓度超过50 mM时会强烈抑制其自身生产并导致细胞活力丧失，需要克服产物抑制以实现高效生产。
关键发现：在65 ml气升式柱反应器中，经197 h适应的细胞较未适应细胞香芹酮生产速率提高8.3倍 等 3 条