核心问题：实现黑曲霉IA-001来源的木聚糖酶基因xynB在毕赤酵母中的高效异源表达，获得高活性、适于工业应用（尤其是动物饲料添加剂）的木聚糖酶。
关键发现：摇瓶水平重组酶活达1280 U/ml，比pPICZαA表达高1.5倍，比原始黑曲霉菌株高19.39倍 等 6 条
核心问题：确定影响植物乳杆菌CRL 725在半合成培养基中核黄素产量的关键因素，并评价核黄素生物合成基因（rib）的表达水平。
关键发现：以蔗糖为碳源、30°C培养时，野生型L. plantarum CRL 725核黄素产量达1569 ng/mL，而葡萄糖为碳源时仅896 ng/mL 等 5 条
核心问题：解析酿酒酵母细胞膜组分在乙醇耐受性中的作用，探究乙醇适应菌株膜成分变化及其与乙醇耐受性的关系。
关键发现：在10% v/v乙醇胁迫下，M5菌株的海藻糖、麦角固醇和脂肪酸含量分别比亲本菌株增加约15.7%、12.1%和29.3% 等 2 条
核心问题：解析基因组改组获得的高耐盐突变株Zygosaccharomyces rouxii 3-2中HOG1基因的突变是否影响其耐盐性和胞内甘油积累，并评估其应用于酱油发酵的安全性。
关键发现：S3-2HOG1全长1860 bp，ORF 1296 bp，与SHOG1相似性99.8% 等 3 条
核心问题：大肠杆菌中重组膜蛋白表达量低、易错误折叠，限制膜蛋白结构与功能研究，需要开发提高功能性膜蛋白产量的策略。
关键发现：使用TF缺陷(Δtig)菌株使膜整合蛋白产量提高3-7倍：ZraS提高>3倍、HtdR提高2.6倍、pSRII提高3.4倍 等 6 条
核心问题：工业酵母菌株遗传背景不明确，缺乏营养标记，难以进行经典遗传操作和分子育种；需要构建遗传背景清晰、发酵性能优良的生产菌株以应用于烈酒生产。
关键发现：构建的二倍体实验室菌株 HHD1（MATa/α ura3-52/URA3 leu2-3,112/LEU2 MAL2-8/C/MAL2-8/SUC2/SUC2）在 90 kg 规模樱桃、李子、梨 mash 发酵中表现出与商业酵母 Siha、Uvaferm 相当的发酵能力。樱桃 mash 中实测酒... 等 20 条
核心问题：在甲醇诱导阶段使用山梨醇作为共底物时，如何优化甲醇流加策略以提高重组蛋白产量、降低氧需求并减少副产物积累。
关键发现：添加山梨醇后，rHuEPO产量在24小时达到130 mg/L，而仅用甲醇时为80 mg/L 等 2 条
核心问题：确定酿酒酵母乙醇耐受性的遗传基础，筛选提高乙醇耐受性的新基因，以应用于工业乙醇生产。
关键发现：Δura7和Δgal6在含8%乙醇的YPAD中倍增时间分别为6.63±0.45 h和7.03±0.32 h，较野生型BY4743（11.78±1.35 h）缩短约一半 等 6 条
核心问题：综述了酿酒酵母作为立体特异性还原工具在单萜和倍半萜类化合物生物转化中的应用，并讨论大规模实施面临的挑战与解决策略。
关键发现：酿酒酵母可将香叶醇立体特异性还原为对映体纯的 (R)-(+)-香茅醇 等 9 条
核心问题：开发一种高效、快速且可重复的裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe 电穿孔转化方法，解决现有锂乙酸法步骤繁琐、电穿孔法效率较低的问题。
关键发现：DTT 预处理显著提高了转化效率：在 25 mM DTT、0.6 M 山梨醇、20 mM Hepes (pH 等 8 条
核心问题：解决大肠杆菌pH 2.5酸性磷酸酶/植酸酶（EcAP）热稳定性差的问题，并提高其催化效率，以应用于动物饲料添加剂。
关键发现：构建了三个EcAP突变体并在毕赤酵母中表达。其中C200N/D207N/S211N突变体表现最佳：植酸酶比活性为63 U/mg（r-AppA为41 U/mg），对pNPP的kcat/Km为5.8×10^5 min^-1 M^-1（r-AppA为2.0×10^5），提高1.9倍 等 3 条
核心问题：登革2型病毒包膜蛋白（Den2E）在毕赤酵母中易被蛋白酶降解且表达量低；需要探索稳定高效表达Den2E并保持其抗原性的策略。
关键发现：Den2E-HBsAg mRNA稳态水平比HBsAg-Den2E高2-3倍 等 6 条
核心问题：大肠杆菌无法正确折叠富含半胱氨酸的ghilanten，需要选择合适的真核表达系统高效分泌表达具有抗凝活性的重组ghilanten。
关键发现：在2升摇瓶BMMC培养基中，重组ghilanten分泌量约10 mg/L 等 4 条
核心问题：在大肠杆菌中表达重组蛋白时易形成包涵体，需探索分子伴侣过表达与乙醇添加联合使用对提高可溶性活性蛋白产量的有效性及其机制。
关键发现：在25 ml摇瓶中，3%（v/v）乙醇使preS2-S'-β-半乳糖苷酶活性提高1.5-2倍 等 7 条
核心问题：在甲基营养酵母Pichia pastoris中实现牛视紫红质（opsin）的功能性表达，为大量生产结构生物学和生物物理研究所需的视紫红质蛋白提供高效表达系统。
关键发现：表达水平为约0.3 mg opsin/L（A600=1.0），实际测定约0.27±0.03 mg/L，约占膜总蛋白的0.6-0.75% 等 8 条
核心问题：大豆根瘤酸性磷酸酶（ACP）在大肠杆菌中表达时形成包涵体，无法获得可溶活性蛋白，难以开展定点突变和深入的生化表征，需要建立合适的真核表达系统。
关键发现：重组ACP在毕赤酵母中分泌表达水平为10 mg/L 等 8 条
核心问题：木质纤维素酶水解中，现有商业纤维素酶热稳定性差，需在较低温度（45-50°C）下操作，导致水解效率低、酶用量大。开发耐热纤维素酶混合物以提高水解温度、降低酶用量并改善过程经济性。
关键发现：耐热酶混合物在60°C下可获得约90%理论水解率（以单糖计），与商业酶在45°C的效果相当 等 6 条
核心问题：异戊二烯类化合物（萜类）的微生物合成与转化过程中，产物的疏水性、挥发性和细胞毒性导致产物抑制、产品损失及产量低下，且缺乏工业规模的有效生物过程。需要开发适当的原位产物移除（ISPR）技术以解决这些问题。
关键发现：柠檬烯在水中的饱和溶解度为0.15 mM，carveol为19 mM 等 5 条
核心问题：如何利用三孢布拉霉（Blakeslea trispora）交配发酵在30 L规模高效生产番茄红素，并抑制番茄红素环化以避免其转化为β-胡萝卜素
关键发现：在30 L发酵罐中，发酵约144 h后番茄红素产量约1 g/L 等 5 条
核心问题：从环境样本中有效分离和筛选新的产虾青素菌株Xanthophyllomyces dendrorhous，并准确鉴定和保存，以挖掘其生物技术潜力。
关键发现：X. dendrorhous的虾青素约占总类胡萝卜素的80% 等 5 条